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上海甄准生物科技有限公司

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分离miRNA或靶mRNA
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产品: 浏览次数:298分离miRNA或靶mRNA
品牌: 甄准生物
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有效期至: 长期有效
最后更新: 2018-07-23 09:18
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microRNA(miRNA)虽然只有22个左右的碱基,但是在基因表达调控中起着至关重要的作用,参与细胞分化、个体发育,且与多种疾病相关。因此对于miRNA的研究越来越多。传统的miRNA分离方法是结合了基于酚/胍的样品裂解和硅胶膜离心柱,直接将总RNA分离出来,不能直接分离出miRNA。
Wako的miRNA纯化试剂盒能够制备高纯度的miRNA片段,在细胞中,成熟的miRNA分子可与Argo naute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC),此纯化试剂盒利用免疫沉淀方法,与Ago蛋白结合抗体的特异性,分离miRNA。纯化的miRNA片段含有非常少的rRNA和tRNA降解片段。与传统的miRNA纯化方法相比,有效提高了miRNA的克隆效率。纯化的miRNA可用于分析miRNA的靶mRNA。
n 特点
1) 内源性Ago蛋白的免疫沉淀
2) 高度纯化与Ago蛋白结合的miRNA
3) 其他RNAs的污染少,比如rRNA & tRNA
4) 纯化的microRNA片段可用于高效的microRNA克隆和微阵列
5) 可同时分离miRNA和靶mRNA,便于直接进行后续的靶mRNA的克隆和定量分析


与常规方法比较
常规方法 Wako的新方法
总RNA提取 需要 不需要
小RNA (≦200nt)的纯化
变性PAGE电泳
从变性PAGE凝胶中进行凝胶抽提
从变性PAGE胶中进行凝胶纯化
rRNA片段污染率
tRNA片段污染率
操作时间 ≦12小时

≦4小时
使用例1:
图1:使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2纯化microRNA片段
从培养的人类细胞系(HeLa,HepG2,HEK293)中纯化的microRNA片段用Urea-PAGE和银染方法(Wako Cat. No. 311-03961;CLEAR STAIN Ag)检测。每个细胞系的数目大约是5×106。上样量是用该试剂盒纯化后获得的5ul microRNA溶液(制备的溶液一般是10ul)。

siRNA药理研究
将小分子干扰RNA(siRNA)直接注入细胞中,这些siRNA结合蛋白元件,也可形成RISC,此试剂盒也可纯化与Ago2结合的siRNA,便于后续的siRNA研究分析。因此此试剂盒不仅能分离miRNA,亦可作用于siRNA,大大拓宽了试剂盒的使用范围。

后续研究:
1)RNAi的抑制效果
2)siRNA的药代过程
3)体内siRNA的稳定性
4)毒性/副作用
5)对于非特异性mRNAs的脱靶效应


货号 品名 规格
291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 10tests
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests
290-66501 microRNA Clo ning Kit 8tests
298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 200units
292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 500units
298-67901 PCR Purification Kit 30tests
298-68001 Target mRNA Clo ning Kit 10tests
用途:主要用于农业,食品,医疗,药品等行业的科研。
作为标准品、对照品或者研究用,不能直接用于人体
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