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3M高灵敏度大肠菌群测试片操作以及判读

放大字体缩小字体发布日期:2006-05-15 浏览次数: 1401
      3M高灵敏度大肠菌群测试片操作以及判读
      一、高灵敏度大肠菌群测试片 操作方法
      1. 未开封时,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期内用完,高温度时,凝固水可以排除,包装物最好于室温启开。 2. 已开封的,将封口以胶带封紧。
      3. 已启开的包装袋不要冷藏并于一个月内使用完。 4. 制备食物样品稀释液,称取或吸取食物样品,置入适宜的无菌容器内,如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内
      5. 加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的旦白胶水(ISO方法6887) 、缓冲旦白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水.但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。

      6、搅拌或均质样品.

      样品的稀释液调PH6.6-7.2对酸性样用IN NaOH、碱性样用INHCI调PH。

      7、将测试片置于平坦表面处,揭开上层膜。 8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。
      9、细心将上层膜缓慢盖下,避免有气光泡产生,切勿使上层膜直接落下。 10、使用压板(平面底朝下)放置在上层膜中央处。
      11、轻轻的压下,使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上,切勿扭转压板。 12、拿起压板,静置至少1分钟以使培养基凝固。
      14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数,并可参考判读卡计算菌落数。 15、可以分离菌落作进一步鉴定,即掀起上层膜,由培养胶上挑取单个菌落。
      13、测试片的透明面朝上,可堆叠至20片。培养时间和温度因方法而有不同,最通用的认可方法是:
      总大肠菌群
      AOAC官方方法986.33和989.10(乳/生乳和其它乳制品)
      大肠菌群:32℃±1℃培养24±2h
      AOAC官方方法991.14(食品类)
      大肠菌群:35℃±1℃培养24±2h
      NMKL方法(147.1993)
      大肠菌群:37℃±1℃培养24±2h
      AFNOR认可方法3M 01/2-09/89A和B(除水生贝壳类动物外的所有食品)
      大肠菌群:30℃±1℃培养24±2h

      耐热的(粪)大肠菌群
      AFNOR认可方法,3M 01/2-09/89C(所有食品) 44℃±1℃培养24±2h。当提高培养温度时,培养箱应有一定的湿度是需要的。
      二、高灵敏度大肠菌群计数测试片 判读方法
      Coliform count = 4? Coliform count = 13
      在PetrifilmTM高灵敏度检验测试片上菌落计数相当容易。测试片中的指示剂使革兰氏阴性菌染成红色,上层膜能截留大肠菌群产生的气泡,当大肠菌群大量产酸时,菌落周围会产生粉红色的菌晕。所以,计数红色带有气泡的菌落为大肠菌群,菌落周围的粉红色菌晕使计数更加方便。
      Coliform count = 30
      圆圈1, 2和3中的气泡形状有所不同。圆圈1中的气泡和菌落相邻;圆圈2中的气泡撑破了菌落,使菌落看似气泡的“轮廓”;圆圈3中的菌落被3个小气泡围住。细菌学手册上规定,红色不带有气泡的菌落不计作大肠菌群。
      Coliform count = 0
      注意图4至图9中培养基颜色的变化。随着大肠菌群数和产酸的增加,培养基的颜色由淡桔黄色(图4)逐渐向明显的粉红色(图9)转变。同时做阴性对照有助于区分培养基的颜色。
      Coliform count = 90
      Estimated coliform count = 320
      圆形的生长面积约为60 cm2。当菌落数大于150个时,可选择1个或多个代表性方格来估算菌落数。计算每个方格的平均菌落数后乘以60,即为估算的大肠菌群数。
      Estimated coliform count = 840
      在接种区边缘的菌落和气泡可能较小,且边缘培养基外观略有差异,但不会影响菌落的计数。见图7。
      Coliform count = TNTC
      在PetrifilmTM高灵敏度检验测试片上,当菌落数过多时难以计数,该现象称为TNTC (Too Numerous To Count) 现象。该现象伴有以下特征:许多小型菌落和气泡,有时培养基颜色会加深。见图8。
      Coliform count = TNTC
      图9中,测试片上有许多小型菌落,培养基颜色变深,为TNTC现象。
      Coliform count = 2
      食品颗粒通常呈不规则形状,且不带有气泡。见圆圈1。在测试片上,人为的气泡可能由于接种不当引起,其形状不规则,且不带有红色菌落。见圆圈2 。
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