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血清不稳定原因及应对解决方案

放大字体缩小字体发布日期:2024-05-27 来源:上海抚生实业有限公司
核心提示:   血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本

  血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。血清在细胞培养中提供细胞生长所需的生长因子、激素、各种蛋白、促进贴壁和铺展的因子、细胞传代时蛋白酶抑制剂和其他多种不明营养物质,以胎牛血清(FBS)的使用最为普遍,其他血清类型还包括小牛血清、成牛血清、马血清、羊血清、鸡血清、兔血清等,其营养类型有很大差异,适用于不同类型细胞。

  血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能:

  1、提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。

  2、提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。

  3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。

  4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

  5、起酸碱度缓冲液作用。

  6、提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。

  血清最大的劣势就是不稳定,不稳定原因如下:

  1、来源不稳定

  以胎牛血清为例,怀孕母牛在屠宰前腹部被剖开,取出胎牛,在低温无菌条件下,刺破胎牛的心脏以获取血清。就这一条,动物伦理组织就可以把你拦住唠唠。另外,牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家,我国在对牛血清的雷竞技百科 《中国生物制品主要原辅料质控标准 2000》中提出比较严格的标准要求,包括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素,细胞增殖支持等检查。

  2、组分不稳定

  还有最让人闹心的,动物血清成分复杂,其组分及含量常和动物性别(公胎牛,母胎牛,如激素)、年龄、生理状态、营养条件不同而有差异,是不是觉得特像中药。还有,尽管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的组分,所以导致标准化极其困难。所以,师兄师姐经常会告诉你说,不同生产厂家的血清差异很大,就是同一厂家生产的不同批次血清差异也很大。

  3、用法不稳定

  实验习惯的不同,都可能导致细胞实验结果的不稳定,比如,有人四度过夜融化,有人急性子,直接扔进水浴锅。新手拿到一瓶血清,第一个问题就是问自己,要不要灭活?还有,别忘了,血清同时含有内毒素、血色素、补体、抗体等其他有害成分,影响细胞生长甚至导致细胞死亡,对某些实验来说,极为重要。

  如此的不稳定,该怎么在实验过程中尽可能的解决呢?

  1、土豪和有得选择的实验室,请选择无血清培养基。

  2、不要频繁更换血清牌子,不同厂家血清来源,生产工艺,包装运输等都有很大差异,尽量不要更换牌子。

  3、选定品牌后,对于经过测试过的好用的血清,同一个批次多囤积一些,计算本次实验的大概用量,然后在多加20%的储备,放在-20或-80度保存。

  4、细胞实验建议每个人用自己的培养基,PBS,胰酶等试剂以及用具,保持实验条件一致性,避免交叉污染,别给自己添堵,也别给别人添堵。

  5、如果实在要更换血清,先将细胞在新的血清里传两到三代,适应新的条件后,细胞状态稳定,再进行后续的实验。

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编辑:songjiajie2010

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