3. 细胞培养上清:

含有细胞分泌蛋白和死细胞的细胞培养液。

将细胞培养上清液吸入离心管中并以 1000×g 离心 20 分钟，除去细胞碎片和杂质，收集上清液备用，样本保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。

4. 细胞裂解液:

经细胞裂解液裂解后的细胞溶液。

（1）吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，然后加入适量的培养基将培养板上的细胞冲洗干净。 悬浮细胞可以省略该步骤。

（2）将细胞悬浮液收集到离心管中，以 1000×g 离心 10 分钟，然后吸去培养基，用预冷PBS 洗涤细胞 3 次。

（3）加入适量的预冷 PBS（建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。在 6 孔培养板中，每个孔 需要 150-250μL 的 PBS 来重悬细胞。

（4）使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞全裂解。也可 以使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞。

（5）4℃下以 10,000×g 离心 10 分钟，去除细胞碎片，收集上清液， -20℃或-80℃保存，避免反复冻融。