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酶标仪的工作原理

放大字体缩小字体发布日期:2024-03-27 来源:Super Lab公众号
核心提示:1.酶标仪的工作原理及结构由酶联免疫吸附实验法可知,酶标仪应该用比色法来分析抗原或抗体的含量,即它应依照比色原理进行工作。

1.酶标仪的工作原理及结构

由酶联免疫吸附实验法可知,酶标仪应该用比色法来分析抗原或抗体的含量,即它应依照比色原理进行工作。实际上,酶标仪就是一台变相的光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计几乎相同。

光源灯发出的光线经过滤光片或单色器后,成为一束单色光束。该单色光束经过塑料微孔板中的待测标本,被标本吸收掉一部分后,到达光电检测器。光电检测器将投射到其上面的光信号的强弱变成电信号的大小。此电信号经前置放大、对数放大、模数转换等模拟信号处理后,送入微处理器进行数据处理和计算。最后由显示器和打印机将测试结果显示、打印出来。

微处理机还通过控制电路来控制X、Y方向的机械驱动机构的运动。但对于非自动型的酶标仪,它是用手工来移动微孔板的,可以省去X、Y方向的机械驱动机构及其电路,这样的仪器体积更小,结构也更简单。

微孔板是一种用来盛装待测样本的透明塑料板,板上有多排小孔,如有40孔板、55孔板和96孔板等多种规格。每个小孔可以盛放零点几毫升的溶液。根据仪器的不同,既可以一个孔一个孔地检测,也可以一排孔一排孔地检测。

酶标仪既可以使用和分光光度计相同的单色器,也可以使用干涉滤光片来获得单色光。和光电比色计一样,使用滤光片作过滤装置时,将滤光片设计到微孔板的前面和后面效果是一样的

光源灯发出的光,经过聚光镜、光阑后,到达反射镜,经反射镜作90°反射后,垂直通过比色液,然后再经滤光片到达光电管。

一般酶标仪的光束既可以设计成从上到下通过比色液,也可以设计成从下到上通过比色。

酶标仪有单通道和多通道两种类型,单通道又分为自动型和手动型两种。其中,自动型的仪器设有X和Y两个方向的驱动机构,在机械装置的驱动下,微孔板上的小孔一个个依次进入光束下面测试。手动型靠手移动微孔板来进行测量。

在单通道酶标仪的基础上,又发展了多通道、全自动型酶标仪。多通道酶标仪一般都是自动型的,它设有多个光束和多个光电检测器。如8通道的仪器,设有8条光束(或8个光源)、8个检测器和8个放大器。在机械驱动装置的作用下,样品被8个一排、8个一排检测。多通道酶标仪的检测速度快,但其结构比较复杂,价格也较贵,多用于大中型医院。

酶标仪的其他部分的结构,与光电比色计和小型生化分析仪基本相同。

2.区别

酶标仪和普通光电比色计的不同之处在于:

1)盛装比色液的容器不是使用比色皿,而是使用了塑料微孔板,塑料微孔板常用透明的聚乙烯材料制作,之所以采用塑料微孔板来作固相载体,是利用它对抗原或抗体有较强的吸附这一特点;

2)酶标仪的光束是垂直通过待测液的;

3)酶标仪通常不使用A而是使用光密度OD来表示吸光度。

酶标仪和分光光度计的主要区别是什么呢?具体差别体现在以下三个方面:

1)盛装待测溶液的容器:分光光度计用的是比色皿,酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用,每个比色皿一次只能盛装一种溶液

酶标板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,因此用它作为固相载体,酶标板通常为48孔或96孔,每个微孔可以盛装不同的溶液

2)光路的方向:分光光度计是水平光路,而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。

垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小,不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。

3)光路的长度:由于光密度(OD值)与吸光系数,待测组分的浓度以及光路长度成正比关系

分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm,所以光路长度固定为1cm。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。

酶标仪采用的是垂直光路,所以光路的长度应该是液体液面的高度,所以测得的值受到样品的体积的影响

编辑:songjiajie2010

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