DEPC（二乙基焦碳酸酯）

（1）DEPC是RNA酶的化学修饰剂，它和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应而抑制酶活性。

（2）DEPC与氨水溶液混合会产生致癌物，因而使用时需小心。

（3）试验所用试剂也可用DEPC处理，加入DEPC至0.1%浓度然后剧烈振荡10分钟再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC，否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。

（4）但DEPC能与胺和巯基反应，因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。

实验步骤如下：

1. 取50~100mg的组织加入1 ml Trizol试剂，用匀浆器打匀（Trizol 先放于冰上）。

2. 将匀浆室温放置5 min。

3. 加入200 μl 氯仿剧烈震荡混匀30s，冰上静置3 min。

4. 12000 rpm，4℃ 离心15 min。

5. 将上清液小心转移到新的1.5 ml离心管中（取400 μl ），加入等量体积的异丙醇，上下颠倒几次混匀，室温下放置15 min。（此步中留意：不要吸取任何中间层物质，宁缺勿滥。）

6. 12000 rpm，4℃ 离心15 min 。

7. 小心移去上清液，防止RNA沉淀丢失。

8. 用70%乙醇（DEPC处理的水配制）洗涤1次，加入700 μl乙醇，将RNA沉淀弹起，漂洗。（此时RNA是不溶解的）

9. 8000 rpm，室温离心10min。

10. 尽可能彻底地吸走上清，防止RNA沉淀丢失。

11. 真空离心干燥3~5分钟，或放在室温下使乙醇完全挥发掉。

12. 沉淀用30 μl DEPC-H₂O溶解。如发现沉淀难溶，68 ℃处理10 min。

13. RNA检测

（1）测定样品在260 nm和280 nm的吸光值 按1OD=40 μg/ ml RNA计算RNA的产量。OD260/OD280在1.8-2.0 。

（2）进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳确定RNA的完整性和污染情况。

低得率：A.样品裂解或匀浆处理不彻底；B.最后得到的RNA沉淀未完全溶解。