1、最重要的第一条,就是检测器的线性响应关系。
在所有的色谱检测器中,除了FPD之外,所有的检测器都遵从线性响应,也就是说m=KS。这里m指单位时间内到达检测器的待测物质的量(包括雷竞技百科 或物质的量),K表示线性响应系数,S表示检测器响应信号的值。也就是说,检测器响应信号的大小与单位时间到达检测器的被测物质的总量成正比。当然我们也知道,这个关系是有范围的,量太大或者太小,都会脱离线性。
2、其次就是第二条,就是塔板理论。
塔板理论充分阐述了峰高与进样量之间的关系,或者说他们之间是成正比的。这个可以参考对塔板理论的说明。
根据这两条,可以肯定的说待测物质的峰高与待测物的进样总量成正比。或者利用微积分可以推断出待测物质的峰面积和待测物的进样总量成正比。既然峰高和峰面积都与进样总量成正比,为什么我们喜欢用峰面积,而不是更简单的峰高呢?这个问题也很简单,因为塔板理论不完全正确,峰形经常不完全满足正态分布,所以峰高的代表性不足。
什么时候峰高能够有良好的代表性?很明显,峰形良好而且对称,成良好的正态分布曲线形状的时候,或者说峰形尖锐且对称的时候。
色谱峰经常拖尾,所以用峰面积定量就可以了,峰面积绝大多数情形下都具有很好的代表性。但是在检测器超载,或模数转换器超载,或峰面积积分不准,或进样代表性不足,以及一些其他特殊情形下,用峰面积也不能得到正确结果。但无论如何,用峰面积定量已经是我们可实行的最准确方法了。
色谱定量方法共四种:外标法、归一化法、内标法、内加法(标准加入法)。
再细分归一化法还可以分为百分比法,带校正因子的归一化法,部分归一化法等。在这些定量方法中,百分比法和外标法最简单,内加法最麻烦。