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pH和温度对色谱峰的影响

放大字体缩小字体发布日期:2022-12-27
核心提示:pH和温度对色谱峰的影响
pH 对保留时间的影响

在反相色谱中随着pH的增加,酸性化合物保留时间缩短,而碱性化合物延长;

缓冲液可以缓冲溶液pH的改变,缓冲液的定义是加入少量的酸或碱时能缓冲pH,就是说添加酸或碱时pH的变化很小。这个保持pH的能力就叫做缓冲能力,它是由缓冲液的浓度和缓冲盐的pKa决定的,缓冲盐在pKa附近的缓冲能力最大。表1列出的是液相中一些常用的缓冲盐的pKa。注意这是在水中测的,没有加有机溶剂。当加入有机溶剂时,pKa会有所变化,但是通常所有化合物的pKa,包括你的分析物的pKa都会有一样的变化。

对于液相常用浓度来说,缓冲液应维持在缓冲盐的pKa的1.5个pH单位左右,当浓度特别稀的时候,如低于5mM,就要把范围缩小,大概+/-1个pH单位。


表1:常用缓冲盐的pKa值(25℃)

缓冲盐

pKa

醋酸盐

4.75

铵盐

9.24

硼酸盐1

9.24

硼酸盐2

12.74

硼酸盐3

13.80

柠檬酸盐1

3.13

柠檬酸盐2

4.76

柠檬酸盐3

6.40

2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)

6.15

草酸盐1

1.27

草酸盐2

4.27

磷酸盐1

2.15

磷酸盐2

7.20

磷酸盐3

12.38

三氯乙酸

0.52

三乙醇胺

7.76

三乙胺

10.72

三氟乙酸

0.50

三羟甲基氨基甲烷(Tris)

8.08

建议在开发方法的时候首先要选择缓冲盐和 pH范围,然后用溶液的选择性微调分离。这个策略快速而高效,而且可以让你避免陷入缓冲液pH的泥潭。



温度

1)建议温度设置在25℃-40℃,适当的柱温保持良好的保留时间的重现性,一定程度上提高柱效,增加分离度。

2)柱温过低,流动相的粘度下降,色谱柱的背压降低。

3)柱温太高,与检测器之间温差太大,使峰变形,加快离子对试剂或缓冲盐对硅胶基质的攻击,硅胶溶解,缩短色谱柱的寿命;柱温太低,使得需要制冷的柱温箱,硬件要求太高,不利于方法的推广。

4)温度的改变会导致保留时间漂移,如果仪器自动进样过夜或过周末,就会发现保留时间随着实验室温度的改变而产生漂移,显然这种问题用柱温箱就可以避免。

编辑:songjiajie2010

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