操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象,并在右侧的列表中参考相应的解决方法。
A、没有压力显示,没有流动相流动
原因
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解决方法
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1、电源问题
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1、接通电源,开机
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2、保险丝被烧坏
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2、更换保险丝
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3、控制器设定不正确或设定失败
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3、a、采取恰当的设定
b、修理或更换控制器
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4、柱塞杆折断
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4、更换柱塞杆
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5、泵头内有空气
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5、溶剂脱气、启动泵抽出空气
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6、流动相不足
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6、a、补充流动相
b、更换入口滤头
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7、单向阀损坏
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7、更换单向阀
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8、漏液
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8、拧紧或更换手紧接头
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B、流动相流动正常,但没有压力显示
原因
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解决方法
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1、仪表损坏
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1、更换仪表
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2、压力传感器损坏
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2、更换压力传感器
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C、压力持续偏高
原因
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解决方法
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1、流速设定过高
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1、调整流速设定
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2、柱前筛板堵塞
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2、a、在允许情况下反冲色谱柱
b、更换筛板
c、更换色谱柱
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3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀
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3、a、使用恰当的流动相
b、冲洗色谱柱
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4、色谱柱选择不当
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4、选择恰当的色谱柱
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5、进样阀损坏
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5、清洗或更换进样阀
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6、柱温过低
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6、提高温度
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7、控制器失常
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7、修理或更换控制器
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8、保护柱阻塞
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8、清洗或更换保护柱
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9、在线过滤器阻塞
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9、清洗或更换在线过滤器
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D、压力持续偏低
原因
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解决方法
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1、流速设定过低
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1、调整流速
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2、系统漏液
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2、确定漏液位置并维修
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3、色谱柱选择不当
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3、选择恰当的色谱柱
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4、柱温过高
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4、降低温度
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5、控制器失常
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5、维修或更换控制器
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E、压力不断上升
原因
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解决方法
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1、见列表C
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1、见列表C
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F、压力降为零
原因
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解决方法
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1、见列表A、B
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1、见列表A、B
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G、压力不断下降,但不回零
原因
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解决方法
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1、见列表D
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1、见列表D
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H、压力波动
原因
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解决方法
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1、泵中有气体
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1、a、溶剂脱气
b、从泵中除去气体
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2、单向阀损坏
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2、更换单向阀
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3、泵密封损坏
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3、更换泵密封
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4、脱气不充分
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4、a、溶剂脱气
b、改变脱气方法(使用在线脱气法等)
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5、系统漏液
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5、确定漏液位置并维修
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6、使用梯度洗脱
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6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动
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漏液
通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。
A、接头处漏液
原因
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解决方法
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1、接头松动
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1、拧紧
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2、接头磨损
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2、更换
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3、接头过紧
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3、a、拧松,再重新拧紧
b、更换
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4、接头被污染
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4、a、拆下清洗
b、更换
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5、部件不匹配
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5、使用同一品牌的配件
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B、泵漏液
原因
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解决方法
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1、单向阀松动
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1、a、拧紧单向阀(不必拧的过紧)
b、更换单向阀
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2、接头松动
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2、拧紧接头(不必拧的过紧)
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3、混合器密封损坏
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3、a、更换混合器密封
b、更换混合器
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4、泵密封损坏
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4、维修或更换泵密封件
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5、压力传感器损坏
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5、维修或更换压力传感器
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6、脉冲阻尼器损坏
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6、更换脉冲阻尼器
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7、比例阀损坏
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7、a、检查隔膜,如果漏液立即更换
b、检查手紧接头,损坏的立即更换
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8、放空阀的损坏
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8、a、拧紧放空阀
b、更换放空阀
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C、进样阀漏液
原因
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解决方法
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1、转子密封损坏
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1、重新安装或更换进样阀
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2、定量环阻塞
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2、更换定量环
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3、进样口密封松动
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3、调整
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4、进样针头尺寸不合适
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4、使用恰当的进样针
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5、废液管中产生虹吸
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5、保持废液管高于废液液面
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6、废液管阻塞
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6、更换或疏通废液管
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D、色谱柱漏液
原因
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解决方法
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1、尾端接头松动
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1、拧紧接头
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2、卡套内有填料
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2、拆下、清洗卡套、重新安装
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3、筛板厚度不合适
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3、使用合适的筛板(参考下表)
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筛板选择指导
物质粒径
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筛板孔径
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3-4u
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0.5u
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5-20u
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2u
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E、检测器漏液
原因
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解决方法
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1、流通池垫片损坏
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1、a、避免过大的背景压力(压力降)
b、更换垫片
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2、流通池窗破碎
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2、更换窗口
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3、手紧接头漏液
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3、拧紧或更换
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4、废液管阻塞
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4、更换废液管
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5、流通池阻塞
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5、重新安装或更换
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液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A、峰拖尾
原因
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解决方法
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1、筛板阻塞
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1、a、反冲色谱柱
b、更换进口筛板
c、更换色谱柱
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2、色谱柱塌陷
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2、填充色谱柱
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3、干扰峰
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3、a、使用更长的色谱柱
b、改变流动相或更换色谱柱
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4、流动相PH选择错误
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4、调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰
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5、样品与填料表面的溶化点发生反应图
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5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b、更改色谱柱
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B、峰前延
原因
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解决方法
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1、柱温低
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1、升高柱温
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2、样品溶剂选择不恰当
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2、使用流动相作为样品溶剂
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3、样品过载
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3、降低样品含量
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4、色谱柱损坏
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4、见A1、A2
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C、峰分叉
原因
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解决方法
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1、保护柱或分析柱污染
图
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1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。
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2、样品溶剂不溶于流动相
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2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。
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D、峰变形
原因
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解决方法
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1、样品过载
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1、减少样品载量
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E、早出的峰变形
原因
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解决方法
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1、样品溶剂选择不恰当
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1、a、减少进样体积
b、运用低极性样品溶剂
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F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原因
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解决方法
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1、柱外效应
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1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)
b、使用小体积的流通池
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G、K’增加时,脱尾更严重
原因
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解决方法
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1、二级保留效应,反相模式
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1、a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)
d、更换一支柱子
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2、二级保留效应,正相模式
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2、a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入水(或多官能团化合物)
d、试用另一种方法
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3、二级保留效应,离子对
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3、加入三乙胺(或碱性样品)
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H、酸性或碱性化合物的峰拖尾
原因
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解决方法
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1、缓冲不合适
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1、a、使用浓度50
b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
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I、额外的峰
原因
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解决方法
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1、样品中有其他组份
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1、正常
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2、前一次进样的洗脱峰
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2、a、增加运行时间或梯度斜率
b、提高流速
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3、空位或鬼峰
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3、a、检查流动相是否纯净
b、使用流动相作为样品溶剂
c、减少进样体积
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J、保留时间波动
原因
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解决方法
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1、温控不当
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1、调好柱温
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2、流动相组分变化
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2、防止变化(蒸发、反应等)
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3、色谱柱没有平衡
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3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
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K、保留时间不断变化
原因
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解决方法
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1、流速变化
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1、重新设定流速
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2、泵中有气泡
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2、从泵中除去气泡
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3、流动相选择不恰当
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3、a、更换合适的流动相
b、选择合适的混合流动相
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L、基线漂移
原因
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解决方法
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1、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)
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1、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器
图
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2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)
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2、使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。
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3、流通池被污染或有气体
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3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)
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4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)
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4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
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5、流动相配比不当或流速变化
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5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
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6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时
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6、用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
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7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
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7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
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8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。
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8、使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
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9、使用循环溶剂,但检测器未调整。
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9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。
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10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
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10、将波长调整至最大吸收波长处
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M、基线噪音(规则的)
原因
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解决方法
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1、在流动相、检测器或泵中有空气
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1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
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2、漏液
图
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2、见第三部分。检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。
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3、流动相混合不完全
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3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
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4、温度影响(柱温过高,检测器未加热)
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4、减少差异或加上热交换器
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5、在同一条线上有其他电子设备
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5、断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。
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6、泵振动
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6、在系统中加入脉冲阻尼器
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N、基线噪音(不规则的)
原因
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解决方法
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1、漏液
图
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1、见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。
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2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
|
2、检查流动相的组成。
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3、流动相各溶剂不相溶
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3、选择互溶的流动相
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4、检测器/记录仪电子元件的问题
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4、断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。
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5、系统内有气泡
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5、用强极性溶液清洗系统
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6、检测器内有气泡
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6、清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器
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7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。)
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7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池
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8、检测器灯能量不足
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8、更换灯
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9、色谱柱填料流失或阻塞
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9、更换色谱柱
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10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
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10、维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置
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O、宽峰
原因
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解决方法
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1、流动相组成变化
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1、重新制备新的流动相
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2、流动相流速太低
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2、调节流速
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3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)
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3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。
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4、检测器设定不正确
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4、调整设定
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5、柱外效应影响
a、柱子过载
b、检测器对反应时间或池体积响应过大
c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大
d、记录仪响应时间太长
图
|
5、
a、小体积进样(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀释样品
b、减少响应时间或使用更小的流通池
c、使用内径为0.007-0.01的短管路
d、减少响应时间
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6、缓冲液浓度太低
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6、增加浓度
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7、保护柱污染或失效
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7、更换保护柱
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8、色谱柱污染或失效,塔板数较低
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8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。
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9、柱入口塌陷
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9、打开柱入口,填补塌陷或更换柱子
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10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
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10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果
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11、柱温过低
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11、提高柱温。除非特殊情况,温度不宜超过
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12、检测器时间常数太大
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12、使用较小的时间常数
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P、分离度降低
原因
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解决方法
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1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)
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1、重新配置流动相
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2、保护柱或分析柱阻塞
图
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2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。
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Q、所有的峰面积都太小
原因
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解决方法
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1、检测器衰减设定过高
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1、减少衰减的设定
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2、检测器时间常数设定太大
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2、设定较小的时间常数
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3、进样量太少
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3、增大进样量
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4、记录仪连接不当
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4、使用正确的连接
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R、所有的峰面积都太大
原因
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解决方法
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1、检测器衰减设定过低
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1、采取较大的衰减
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2、进样过多
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2、减少进样量
|
3、记录仪连接不正确
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3、正确连接记录仪
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以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。
A、手动进样阀,转动不灵
原因
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解决方法
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1、转子密封损坏
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1、更换或调整转子密封
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2、转子太紧
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2、调整转子的松紧度
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B、手动进样阀,载样困难
原因
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解决方法
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1、进样阀安装不当
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1、重新安装
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2、定量环阻塞
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2、清洗或更换定量环
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3、进样器污染
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3、清洗或更换进样器
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4、管路阻塞
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4、清洗或更换管路
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C、自动进样阀,不能转动
原因
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解决方法
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1、无压力(或电源)
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1、提供恰当的压力(电源)
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2、转子太紧
|
2、调整转子的松紧度
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3、进样阀安装不当
|
3、重新安装
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D、自动进样阀,其它问题
原因
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解决方法
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1、阻塞
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1、清洗或更换阻塞部件
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2、机械故障
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2、见随机维修手册
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3、控制器故障
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3、维修或更换控制器
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由气味、景象和声音可以发现的问题
你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯,每天花上几分钟运用你的感官(除了味觉)来“感觉”你的液相色谱是否存在问题,这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。
A、溶剂的气味
原因
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解决方法
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1、漏液
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1、见section 3
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2、溅出
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2、a、检查废液瓶是否已满
b、找到溅出的部位并清洗干净
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B、热气味
原因
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解决方法
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1、仪器过热
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1、a、检查并调节通风设施
b、检查并调节温度设定
c、关掉仪器,查找维修手册
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C、读数不正常
原因
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解决方法
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1、压力不正常
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1、见section 2
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2、柱温箱问题
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2、
a、检查并调节设定
b、参照用户手册
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3、检测器灯失效
|
3、更换灯
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D、灯警告
原因
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解决方法
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1、压力超出极限值
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1、
a、检查是否阻塞
b、检查并调节极限值的设定
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2、其它警示灯
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2、见用户手册
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E、警告音
原因
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解决方法
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1、溶剂泄漏/溅出
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1、找到并解决
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2、其它警告音
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2、见用户手册
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F、刺耳的短音或长音
原因
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解决方法
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1、轴承失效
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1、见用户手册
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2、润滑不够
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2、进行恰当的润滑
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3、机械故障
|
3、见用户手册
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常见故障及日常维护
下表中列出了液相色谱常见的一些问题,右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。
溶剂瓶
问题
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维护
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1、进口筛板阻塞
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1、
a、更换(3-6个月)
b、过滤流动相,0.5u滤膜
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2、气泡
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2、流动相脱气
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泵
问题
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维护
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1、气泡
|
1、流动相脱气
|
2、泵密封损坏
|
2、更换(3个月)
|
3、单向阀损坏
|
3、过滤流动相,运用在线过滤,准备备用单向阀
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进样阀
问题
|
维护
|
1、转子密封损坏
|
1、
a、不要拧的过紧
b、过滤样品
|
色谱柱
问题
|
维护
|
1、筛板阻塞
|
1、a、过滤流动相
b、过滤样品
c、运用在线过滤或保护柱
|
2、柱头塌陷
|
2、a、避免使用PH>8的流动相(针对大部分硅胶的柱子)
b、使用保护柱
c、使用预柱(饱和色谱柱)
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检测器
问题
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维护
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1、灯失效,检测器响应降低,噪音增大
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1、更换(6个月)或准备备用灯
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2、流通池有气泡
|
2、a、保持流通池清洁
b、池后使用反压抑制器
c、流动相脱气
|
一般
问题
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维护
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1、腐蚀/摩擦损坏
|
1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁
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