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反相色谱RPC

放大字体  缩小字体 发布日期:2013-07-04  来源:实验室RAYBET雷竞技竞彩 网  浏览次数:833
核心提示:   反相色谱( RPC)是高效液相色谱HPLC最受欢迎的一个应用,尤其对蛋白的表征非常有用。因为样品的洗脱与其增水性有很大关系
   
       反相色谱( RPC)是高效液相色谱HPLC最受欢迎的一个应用,尤其对蛋白的表征非常有用。因为样品的洗脱与其增水性有很大关系,一般不可能在洗脱时间(体积)的基础上识别被分离的样品。通常,每一洗脱片段都必须用其它技术进行进一步的分离和分析,才能得到蛋白质分子的分子行为表征。
  在 HPLC系统的基础上,加上一台miniDAWN或DAWN检测器,会大大简化蛋白的表征,可以直接测绝对分子量并可观察溶液中的蛋白特性。
  图 1是轻度氧化的基本纤维原细胞增长因子(bFGF)(由0.2当量的DTNB制成)的色谱图。前两个峰的光散射信号大约是UV信号的两倍,而第三个峰两者的信号强度相等。从图上很清楚地看出,从左到右三个峰,其中两个是两种二聚体,一个是单体bFGF,它们的分子量分别是33K,34K,17K道尔顿。
  图 2是四个不同组分的分子量对洗脱体积图,每一组分都有不同程度的氧化。很明显,存在着二聚体、三聚体、四聚体,但出现的顺序和洗脱体积的顺序不一致。
  采用的系统是 HPLC,包括HP 1050四元泵、脱气机、自动进样器,UV二极管阵列检测器和一台miniDAWN。一根Vydac C4蛋白柱。(150mm×4.6mm,300埃),流速0.7ml/min.
  miniDAWN可对每个洗脱峰进行绝对表征,另外,还可测得每一洗脱片段的均方根旋转半径。例如:对bFGF五聚体,其旋转半径大约为13纳米,表明分子量85K道尔顿的多聚体是棒状结构的构型。
 
  只要在反相色谱 RPC上加一台miniDAWN就可对每一洗脱片段测量绝对分子量、多聚体的形状、分子尺寸 、分子构型。
编辑:songjiajie2010

 
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关键词: 反相色谱RPC
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