1.1

三区平板划线

三区划线中第一区所占的区域大约是平板面积的五分之一到四分之一。第二区搭过第一区的面积使微生物数量得到“稀释”，第三区搭过第二区的面积使微生物数量进一步“稀释”，第三区不可与第一区有重叠的划线。一般适用于可疑菌落的分离，或可疑菌落的二次平板分离。通常划完三区后就可以出现单菌落。三区划线如下图。

1.2

四区平板划线

四区平板划线与上面的三区划线类似，只是每一区的划线面积相应减小，同样第三区不可与第一区相重叠，第四区不可与第二区和第一区相重叠，四区划线比三区划线多稀释一次，这样通过增加划线区域，有可能会分离到更多更纯的单菌落。

1.3

单次连续“之”字平板划线

其实在微生物划线接种中，无论是试管斜面划线接种还是平板划线接种，都会用到“之”字划线。“之”字划线的要领是：往复不间断划线，但是又不与划过的路线重复或重叠。如果菌量比较大，就可以划得更为密集或者增加一块平板继续“之”字划线（即连续划两块板）。“之”字划线一般适用于分离本身在此培养基上单一且黏性较大的菌类或可疑菌落的纯培养。操作如下图所示。

1.4

网状平板划线

网状平板花线，其实就是两次方向垂直的“之”字划线重叠在一起，一般用于纯培养，目的是通过增加更多的划线路径来获得更多的纯培养物，特别是针对一些生长较慢或菌落非常细小的菌类。

三区划线法的具体步骤

在以上的这些平板划线的方式中，三区平板划线最常用的是分区划线法，详细步骤如下：

① 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种还环烧红。

② 在火焰旁冷却接种换环，打开试管塞。

③ 将试管口通过火焰，旋转试管口并小幅度来回移动试管，切不可长时间让试管口停滞于火焰上加热。

④ 将已冷却的接种环伸入菌液中，挑取一环菌液。

⑤ 将试管口通过火焰几次后，塞上试管塞。将试管放回试管架。

⑥ 左手拿起培养皿，将培养皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌液的接种环迅速深入平皿内。从平皿边缘开始“之”字划线（基准线也称第一区域），大约划过平皿的五分之一到四分之一左右的面积。关闭培养皿盖，将培养皿调转大约120°。再次灼烧接种环，将接种环在空气中或靠在培养皿盖内侧冷却后从第一区域末端开始往第二区内划线。两个区域划线的交角大约是120°。重复以上动作，完成第三区（甚至第四区）划线操作。注意：当前操作的划线只能与相邻前一区域相交，绝不能与其他区域的划线有重叠。

一般三区划线就能分离出单菌落，第一区和第二区前部的细菌生长成“直线”，第二区后部的细菌生长呈“虚线”。第三区呈“虚线”和离散的“小点”（即单菌落）。