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庆大霉素(Gentamicin)ELISA检测试剂盒说明书

放大字体缩小字体发布日期:2011-03-14 来源:北京华安麦科生物技术有限公司
核心提示:庆大霉素(Gentamicin)ELISA检测试剂盒说明书


一、概要
庆大霉素(Gentamicin, GEN)属于氨基糖甙类抗生素,主要作用于革兰氏阴性细菌,由于其抗菌谱广、疗效佳且价格低廉而广泛应用于兽医临床和动物饲料添加剂。但GEN的血清有效浓度与毒性浓度很相近,安全范围较小,在其应用过程中易产生毒副作用,尤其大剂量不规范使用,易导致动物性食品中GEN残留超标,对人体健康构成危害,对脑神经、听觉以及肾脏的损害严重。现有的检测庆大霉素方法如色谱法或色谱-质谱联用技术其样品前处理复杂、所需仪器昂贵、操作复杂、耗费时间。而使用庆大霉素ELISA试剂盒能够既快速又准确的分析样品中庆大霉素残留。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品,操作时间短于50min,能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被庆大霉素抗原,样品残留的庆大霉素和微孔条上预包被的抗原竞争抗庆大霉素抗体,加入酶标二抗后,加入TMB底物显色,样品吸光值与其残留物庆大霉素成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中庆大霉素的含量。

三、适用范围
可定性、定量检测牛奶、动物组织等样品中庆大霉素的残留量。

四、交叉反应率
庆大霉素……………………………………………………100%

五、检测步骤
测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。

操作步骤:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样品和标准品对应微孔按序编号,每个样品和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样品孔所在的位置。
5 加标准品/样品:加标准品/样品50l/孔到对应的微孔中,然后加入庆大霉素抗试剂50l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300l/孔,充分洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、加酶标物:加入庆大霉素酶标物100l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min,取出重复洗板步骤6。
8、显色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15~20min。
9、测定:加入终止液50l/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加终止液用目测法可进行判定)。
六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度:0.1ppb
样品最低检测限:
组织………………………………………………3ppb
牛奶…………………………………………… 3.5ppb
回收率:
组织…………………………………………………80±10%
牛奶………………………………………………… 80±10%
精密度:
试剂盒的变异系数均小于10%

七、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样品没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min(或更长),但不得超过30min。反之,则减短反应时间。
9、该试剂盒最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。


八、贮藏条件及保存期
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:该产品有效期为12个月。


编辑:songjiajie2010

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关键词: 庆大霉素 ELISA

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