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黄曲霉毒素M1检测试剂盒说明书

放大字体缩小字体发布日期:2011-02-24 来源:生物在线
核心提示:黄曲霉毒素M1检测试剂盒说明书

产品简介及操作步骤:

一、概要
黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液,动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物,也是一种强致癌物质。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC),薄层层析法(TLC)等。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品,操作时间短于60min,能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理
黄曲霉毒素M1检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素M1抗原,样本中黄曲霉毒素M1和此抗原竞争黄曲霉毒素M1抗体,同时黄曲霉毒素M1抗体与酶标二抗相结合,经TMB底物显色,样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素M1成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中黄曲霉毒素M1的含量。

三、黄曲霉毒素M1检测试剂盒适用范围:
可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1。

四、使用单位需自备的设备及试剂
设备:
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅振荡器
┅┅离心机
┅┅天平:感量0.01g
┅┅微量移液器:单道 20l~200l、200l~1000l、多道 250l
┅┅刻度移液管:25ml
┅┅洗耳球
┅┅三角瓶:100ml
┅┅聚苯乙烯离心管:10ml/50ml
试剂:
----去离子水

五、提供的材料与试剂
组份名称、酶标板、高浓度标准品(810ppb)、AFM1酶标物、AFM1抗试剂、底物液A液、底物液B液、终止液、浓缩洗涤液(10×)、AFM1浓缩样品/标品稀释液(4×) 注:试剂盒检测范围0.05ppb~4.05ppb

六、溶液的配制
配液1: 样品/标品稀释液
配液2: 洗涤工作液
配液3:6个不同浓度的标准液

七、样本前处理步骤
(一)牛奶
┅┅将含脂牛奶降温至10℃以下,于3500转/ min下离心10min;
┅┅用吸管弃去上层脂肪层,下层牛奶液即为待测液。(脱脂牛奶直接测定)
(二)奶粉
┅┅取5g奶粉于100ml三角瓶中,加入25ml蒸镏水;
┅┅振荡5min,使其完全溶解;
┅┅之后样品处理同牛奶样品处理方法。

八、检测步骤
测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
5、黄曲霉毒素M1可致癌,应戴手套操作。
操作步骤:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷冻。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加标准品/样本50l到对应的微孔中,加入AFM1酶标物50l/孔,再加入AFM1抗试剂50l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300l/孔,充分洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15~20min。
8、测定:加入终止液50l/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加终止液用目测法可进行判定)。

九、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒检测下限:0.05ppb
回收率:牛奶:90±15%
奶粉:85±15%
精密度:试剂盒的变异系数均小于10%

十、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件:保存试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min(或更长)。反之,则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,请加热溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

十一、贮藏条件及保存期
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:该产品有效期为12个月。
编辑:songjiajie2010

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