1.在10~20 ml 预杂交液中68℃温育膜2h。
2.若使用双链探针,在100℃下加热32P标记的双链DNA 5 min,使之变性,然后迅速移至冰水中冷却。
3.把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中,在合适的温度下继续温育12~16h。
4.杂交后,将膜从塑料袋中取出,在室温下迅速转移到含有100~200ml 1×SSC,0.1%SDS的塑料盒内,将盒盖好,置于水平振荡器上,温和振荡10 min。
5.将膜转移至另一含有100~200ml预热至68℃、含0.1%SDS的0.5×SSC的塑料盒中。68℃下温和振荡10min。
6.重复步骤5,再洗涤至少2次,使68℃下共洗涤3次。
7.在印迹纸上晾干膜,然后让膜于-70℃下在含增感屏的暗盒内对X线片(Kodar XAR-5或相应的胶片)放射自显影24~48h。此外,也可通过磷图像系统扫描得到膜上的图像。