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蛋白质组学入门--HPLC 篇

放大字体缩小字体发布日期:2006-06-28

      1 . HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法
      样品量不足:解决办法为增加样品量
      样品未从柱子中流出:可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
      样品与检测器不匹配:根据样品化学性质调整波长或改换检测器
      检测器衰减太多:调整衰减即可。
      检测器时间常数太大:解决办法为降低时间参数
      检测器池窗污染:解决办法为清洗池窗。
      检测池中有气泡:解决办法为排气。
      记录仪测压范围不当:调整电压范围即可。
      流动相流量不合适:调整流速即可。
      检测器与记录仪超出校正曲线:解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。
      2 . 做 HPLC 分析时,柱压不稳定,原因何在? 如何解决?
      原因可能有: ?

      泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;
      比例阀失效,更换比例阀即可。
      泵密封垫损坏,更换密封垫即可。
      溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;
      系统检漏,找出漏点,密封即可。
      梯度洗脱,这时压力波动是正常的。
      3 .我购买的 HPLC 柱验收测试时柱压过高,请问为什么?
      柱压过高是 HPLC 柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。

      拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;
      把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查。
      将柱子的进出口反过来接在仪器上,用 10 倍柱体积的流动相冲洗柱子, ( 此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动性 ) 。这时,如果柱压仍不下降,再检查;
      更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题, SGE 提供的 Rheodyne 7315 型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
      4 .液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?
      筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。
      存在干扰峰,解决办法为使用较长柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子。



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