配制试剂溶液：用蒸馏水把试剂配成0.25-0.5%的溶液，将溶液储存在黑暗条件下或棕色瓶中。

去除水稻颖壳：将水稻样品放入出糙机中进行出糙，出糙后清除稻粒中的颖壳，然后随机取出种子试样2份，每份100粒。

巧切米粒种胚：用左拇指、食指捏紧米粒，露出胚部，右手拇、食、中指捏紧单面刀片，沿着米粒种胚轻轻斜削，即可将米粒种胚剖开。

放入试液浸种：将胚切好后的米粒放入培养皿中，倒入配制的四氮唑溶液，液面以刚好淹没米粒为佳，避光，放到30℃的温度下浸渍15分钟。

测算发芽率：凡种胚染成红色的种子为有生活力的种子，芽鞘、根鞘、胚根尖端、盾片上、下端不染色，其余部分染色的也是有生活力的种子。种胚全部不染色或染成浅红色或盾片中部、胚根、胚轴、胚芽等其中之一不染色的为无生活力的种子，然后根据鉴别的结果算出生活力的百分率。生活力的百分率要高于自然发芽率的百分率的8-10%，也就是说，在一般情况下生活力的百分率减去8-10个百分点，即为田间自然发芽率的百分率。

用四氮唑测定水稻发芽率具有经济、省力、快速、准确的特点。但须注意，四氮唑具有较强的感光性，有毒，因此必须避光保存，处理后的种子不能作饲料，试验完毕后应洗手。