如何通过SDS-PAGE检测小肽？

您的样品是否含有<20 kDa的目标蛋白质？请下载如何使用SDS-PAGE检测合成肽的方案，其中包括考马斯蓝染色，银染和电印迹的有效方法。
Tricine-SDS-PAGE常用于分离1-100 kDa雷竞技百科 范围内的蛋白质。它是用于分辨小于30kDa蛋白质的首选电泳系统。
通过SDS-PAGE看到小肽确实是非常困难的。 Tris-tricine凝胶会给你更好的分辨率。如果您只想检测肽，质谱仍然是确认肽身份的最佳方法。
小肽与较大的蛋白质结合较少的考马斯亮蓝色。因此，较小的肽通过考马斯染色或银染更难以检测。如果你真的想在凝胶上看到你的肽，你可以尝试加载更多的样品。除非您认为您的肽从凝胶中迁移出来，否则更换凝胶百分比不会有多大帮助。您可以增加常规17％凝胶中交联剂的百分比。此外，与常规8.8相比，将分辨凝胶的pH值提高到9.5。另外，尿素（4-8M）的添加有助于削尖带。
如果您要使用西方，这是一种更灵敏的检测方法，请使用西方，而不是凝胶染色。然而，肽可以简单地穿过膜。如果你重复实验，试着把两片膜片和更短的时间转移（在200毫安时少于1小时）。 0.2um的毛孔就足够了。你可以得到更小的毛孔，但这不应该是必要的。您可能需要按设备的建议电流密度（mA / cm2）进行半干转印15-20分钟。短的15分钟转移时间适用于大多数小肽。
如果您可以提前计划并合成用生物素标记的对照小肽，您可以监测转移过程及其与链霉亲和素缀合的HRP结合膜的能力。