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双氰胺(别名二氰二胺、二聚氰胺)用途广泛，是生产三聚氰胺的原料，也是医药和染料的中间体。在医药上用于制取硝酸胍、磺胺类药物等。也可用来制取硫脲、胍、硝酸纤维素稳定剂、橡胶硫化促进剂、钢铁表面硬化剂、印染固色剂、人造革填料及黏合剂等。
此次新西兰奶粉中双氰胺的污染源头是新西兰农民普遍会在牧场使用双氰胺化肥，目的是控制硝化菌的活动，使氮肥在土壤中的转化速度得到调节，减少氮的损失，提高肥料的使用效率。
双氰胺属于低毒类化工品，其半数致死量(小鼠，经口)>4000mg/kg，空气中最高容许浓度5
mg/m?
1、实验
1.1 仪器
仪器：Hanon-LC7000高效液相色谱仪，离心机，超声波清洗机，涡旋振荡器，离心机、万分之一天平。
1.2 色谱条件
色谱柱：Venusil HILIC 5μm 100A;4.6*250mm;
流动相：A：10mmol/L乙酸铵(pH=4.0);B：乙腈;A：B=10:90;
检测波长：218nm;(UV扫描后双氰胺在218 nm 的波长处有最大吸收)
进样量：10ul;
柱温：30℃;
流速：1ml/min
1.3 试剂和标样
双氰胺标准品， Venusil HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵(分析纯)、乙酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)，实验用水为超纯水
1.4 样品制备
样品从生产商处获得疑似含有双氰胺的奶粉样品2个。
1.4.1 样品预处理：提取、净化
奶粉样品精密称取1g后置于15 mL离心管中并分别加入10 mL水。经过1 min旋转振荡后，再将样品超声分散30 min。之后各加入1 mL稀释的醋酸溶液(3%, v/v)，将样品溶液在4 ℃条件下至少放置30 min。经过15 min离心后(离心转速≥10000 r/min)，将上清液转移至10 mL容量瓶中用去离子水定容。在进样之前，样品溶液用0.45 μm的滤膜过滤。
1.5 标准品制备、线性关系和定量限
精密称取双氰胺标准品50mg于50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液;
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1ug/ml，0.5ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，5.0ug/ml和10.0ug/ml的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立工作曲线，得到线性方程Y=116.44X 3.2699 ，相关系数为 R=0.9997
定量限为：0.1ug/ml
1.6 结果和讨论
1.6.1 色谱条件的优化
双氰胺是一种亲水化合物，在传统的反相色谱柱(例如C18或C8色谱柱)上保留很弱。多数分析双氰胺的RP方法都需要采用一种离子对试剂，例如辛烷硫酸盐。在流动相中加入离子对试剂可以使双氰胺得到较好的保留值，但是离子对试剂可能会包覆在反相固定相上而改变反相色谱柱的一些保留特性，可能对其他样品在这根色谱柱上的分离造成影响。因此用HILIC 色谱柱分离双氰胺，既得到了良好的保留，也实现了很好的分离度。
1.6.2 结果图例
A:双氰胺标准样品的保留时间和重复性
上图为用HILIC柱分离5次连续重复进样10 μg/mL双氰胺标准液的色谱叠加图，可以看出在此色谱条件下双氰胺得到了良好的保留和具有很好的重现性
B：2个奶粉样品的双氰胺分离叠加图谱
上图可见，谱图2的样品峰中检测出了双氰胺峰，与其他干扰峰的分离状况良好
1.6.3 结果和讨论
本文介绍了一种简单有效的(液态牛奶和奶粉)前处理方法并结合海能LC7000高效液相色谱(HPLC)检测样品中的双氰胺。利用10mmol/L乙酸铵(pH=4.0)和乙腈作为流动相，双氰胺得到了良好的保留。这种流动相能够防止离子对试剂损害色谱柱，使用该方法的背景噪声小、检出限低。并且新发展的样品处理方法也能够降低劳动强度并具有更高的回收率。
