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HPLC方法测定没食子中没食子酸的含量

放大字体缩小字体发布日期:2012-12-11 来源:中国化工仪器网
核心提示: HPLC测定没食子中没食子酸的含量

没食子酸,别名3,4,5-三羟基苯甲酸、五倍子酸;棓酸、没食子酸(无水);在制药,墨水,染料,食品,轻工和有机合成等方面有许多用途.没食子酸与三价铁离子生成蓝黑色沉淀,是蓝黑墨水的原料;工业上也用于制革;还可做照相显影剂.没食子酸丙酯为抗氧剂,可用于食用油脂以防腐臭变质.在医药上没食子酸是止血收敛剂,也是温和的局部刺激剂.
目的建立没食子中没食子酸的含量测定方法.方法采用液相色谱法测定没食子酸的含量,色谱柱为Waters Symme @Cl8柱(5μm,4.6 mm×150mm);流动相为甲醇一0.05%磷酸溶液(5:95);流速0.8 ml/min ;检测波长273 Bill.结果没食子酸进样量在0.0506~0.4060μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.99%,RSD:1.5%.结论所用方法简便、快速、准确.

采用HPLC测定没食子中没食子酸的含量.
1、实验部分
1.1 仪器与试药:高效液相色谱仪包括Waters Delta 6OO泵,waters 2996 PDA检测器(美国Waters公司).没食子药材(新疆维吾尔自治区药品检验所鉴定);没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0831—9501);甲醇(色谱纯);磷酸(分析纯);水为重蒸水.
1.2 色谱条件
色谱柱为Waters SymmetryCl8(5μm,4.6mm×150 mm);流动相为甲醇一0.05%磷酸溶液(5:95);检测波长273nm;流速0.8 ml/min ;柱温25℃.
1.3 方法与结果
1.3.1 溶液的制备:精密称取没食子粗粉1 g,置50 m1量瓶中,加甲醇30 m1,超声提取1 h,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,精密吸取续滤液l m1,甲醇定容至l0 m1量瓶中,摇匀,作为供试品溶液.精密称取干燥至恒重的没食子酸对照品2.55mg,置50 m1量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得对照品溶液.
1.3.2 线性范围的考察:精密吸取没食子酸对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml于5个l0 m1量瓶中,分别加甲醇至刻度,摇匀,各吸取l0 l注入高效液相色谱仪,以进样量( g)为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,回归,得线性方程为:A=1.468×lO6C-1. 739×lO4(r=0.9997).结果表明,没食子酸在0.0506 0.4O60/_tg范围内,具有良好的线性关系.
1.3.3 精密度试验:在“1.2.1”项条件下,精密吸取没食子酸对照品溶液10μl,连续进样6次,峰面积的RSD=1.3% ,表明仪器精密度良好.
1.3.4 稳定性实验:取室温下放置的样品溶液,在20 h内进样6次,其峰面积的RSD=2.4%,表明样品溶液在室温下20 h稳定.
1.3.5 方法精密度(重复性)试验:精密称取没食子药材1g,按“1.3.1”项下方法制备6份供试品溶液,分别测定没食子酸的含量,RSD=3.8%,证明此方法精密度良好.
1.3.6 加样回收率试验:精密称取已知含量的没食子样品细粉,分别加入没食子酸对照品。
1.3.7 样品的测定:精密称取没食子药材1g,按“1.3.1”项下方法制备供试品溶液,经微孔滤膜(0.45μm)过滤,取续滤液l0 l进样,同时进l0μl对照品溶液,进样5次,用峰面积按外标法计算,得没食子酸的平均含量31.65 mg/g,RSD=0.98%(n=5).
2、讨论
没食子中主要含有可水解的鞣质,加热提取会水解成没食子酸,因此,样品选用超声提取的方法.曾分别超声0.5、1.0、1.5、2.0 h,结果显示,1.0 h已经提取完全.文中方法用于没食子中没食子酸的含量测定,操作简便,结果准确.
编辑:songjiajie2010

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关键词: HPLC 没食子酸

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