【文章来源】药物微生物检验公众号
药品中的成分复杂,包括有效成分、辅料(淀粉、糊精、色素等),这些成分当中的有机物很容易遭受微生物污染。在药品生产过程中,微生物检测是评价产品雷竞技百科 和安全性的重要指标之一。在微生物检测的过程中,菌种保藏是一项重要的基础性工作。使用正确的方法对菌种进行保藏可以有效地避免菌种的死亡、退化和污染,便于生产及科学研究。国家也颁布了相应的法规和标准。
一、菌种的复苏
1.制备菌悬液母液:根据微生物的种类,向冻干菌种管中加入适量适合微生物生长的培养液(如表1.1[1]注意是液体培养基),混合均匀。
表1.1 不同菌种适用的液体培养基
菌株种类
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培养液
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细菌
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营养肉汤
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白色念珠菌
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沙堡液体培养基
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分枝杆菌
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苏通综合液体培养基
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黑曲霉菌
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麦芽浸膏营养肉汤培养基
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2.将菌悬液按照合适的比例加入到含有培养液的试管中,根据微生物的种类确定培养温度和培养时间(表1.2)[1],进行菌种复苏。培养后的微生物为第1代培养物。
表1.2 不同菌种的培养温度和培养时间
菌株种类
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培养温度
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培养时间
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一般菌种
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36 ℃±1 ℃
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18 h~24 h
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黑曲霉菌
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30 ℃±1 ℃
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42 h~48 h
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二、菌种传代
1.根据菌株种类选择合适的固体平皿培养板(如表2.1[1]注意是固体培养基),取第1代培养物进行划线接种,并在适宜温度和培养时间下培养。平皿上长出的菌落为第2代培养物。
表2.1 不同菌种适用的固体培养基
菌株种类
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培养液
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细菌
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营养琼脂培养基
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白色念珠菌
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营养琼脂培养基
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分枝杆菌
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改良罗氏培养基或其他商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基
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黑曲霉菌
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麦芽浸膏琼脂培养基
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2.在含有第2代培养物的平皿上挑取典型菌落,接种到相应的培养基平皿或斜面上,在适宜温度和培养时间下培养(表2.2)[1],记为第3代培养物。
表2.2 不同菌种的培养温度和培养时间
菌株种类
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培养温度
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培养时间
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一般菌种
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36 ℃±1 ℃
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18 h~24 h
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分枝杆菌
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36 ℃± 1℃
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72 h
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黑曲霉菌
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30 ℃±1 ℃
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42 h~48 h
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3.按照上述方法将菌种培养至所需代数即可。
三、流程示意图
四、操作要点
1.选择合适的培养基很重要。
2.全程无菌操作,避免污染。
3.培养时间不要过长。
4.信息标注很重要(菌种名称、菌种号、代数、传代日期等)。
五、参考文献
[1]WST683-2020 消毒试验用微生物要求
具体的操作细节依据标准即可,小编就不赘述了。需要WS/T 683电子版的小伙伴记得关注公众号后,加小编微信好友领取哦!
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