手机版
1. 引物：逆转录引物主要有3种，包括 Oligo（dT）、Random Primers和基因特异性引物（GSP）。其中Oligo（dT)具有12-20个T碱基，并且与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可合成全长的cDNA，但仅扩增有polyA尾的mRNA ，对模板雷竞技百科 要求高，较适合克隆实验。而Random Primers具有6-9个碱基，可随机识别模板并结合，适合复杂结构和微量模板，但特异性低，小片段多，适合后续qPCR实验。基因特异性引物可以识别特定模板序列，具有特异性强，灵敏度高的特点，但需合成特定的序列。所以根据不同实验需求可进行相应引物的选择。
2. 逆转录酶：一种是来自纯化的禽成髓细胞瘤病毒（AMV），由两条肽链组成，具有聚合酶活性和很强的RNaseH活性，它最适温度是42℃，最适pH8.3，在高反应温度时可消除 mRNA的二级结构对逆转录的阻碍，然而高水平的RNaseH的活性既抑制cDNA产生也限制其长度。另一种来源于鼠白血病病毒（M-MLV），是单肽链的，有RNA聚合酶活性和相对较弱的 RNaseH活性，最适温度37℃，最适pH7.6，较弱的RNaseH活性对获得2-3kb的mRNA的全长cDNA有很大好处。
3.RNA模板：通常利用紫外分光光度计检测纯度，要求A260/280=1.9~2.1,A260/230=2.0~2.2。利用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整度，完整的总RNA在进行琼脂糖凝胶电泳时会产生清晰的28S和18S rRNA条带（真核样品），28S rRNA条带的强度应当大致为18S rRNA条带的两倍，并且无gDNA和蛋白残留。
