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125I标记单克隆抗体技术

放大字体缩小字体发布日期:2013-10-12 来源:仪器设备行业网
核心提示:125I标记单克隆抗体技术同位素标记是一种重要的抗体标记技术,牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺
125I标记单克隆抗体技术
同位素标记是一种重要的抗体标记技术,牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外,还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。
  一 原理
氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将I2氧化为I+并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的McAb仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。
  二 方法
      在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg/100μl,
      再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液
      再加入10μl含1mCi125I
          ↓
      加入10μl氯胺-T5mg/ml溶于0.05M
      磷酸盐缓冲液,孵育时间不超过30秒
             ↓
      加入100μl偏重亚硫酸钠1.2mg/ml溶于
      0.05M磷酸缓冲液
             ↓
      加入200μl KI溶液少许结晶KI溶于0.05M
      磷酸缓冲液+4%牛血清白蛋白
             ↓
      用PD10柱Sephadex G25除去游离125I
      用4%BSA PBS洗脱
             ↓
      分部收集,0.5ml/管
  每管取5μl进行γ计数,计算标记抗体的比活性和标记率
           结合于McAb125I放射性强度cpm
    标记率%=───────────────────
              总放射性强度cpm
                结合于某一管McAb上的放射性强度
    比活性μCi/μgMcAb=────────────────
                    某一管McAb总量
  三 试剂器材
  1. 纯化后的McAb
  2. 0.05M磷酸缓冲液,氯胺桾,偏重亚硫酸钠,KI,BSA
  3. 125I
  4. 有通风装置的超净台,γ计数仪
5. PD10柱Sephadex G25
  四 注意事项
  1. 严防同位素污染,工作人员必须穿着工作衣,戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用125I和标记物应妥善保管。
  2. 如标记细胞因子、激素等,应选用更温和的标记方法,使保持更好的生物学活性。
编辑:songjiajie2010

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