生活饮用水中的微生物指标
项目 |
单位 |
限值 |
说明 |
总大肠菌群 |
MPN/100mL或 CFU/100mL |
不得检出 |
一般性污染 |
大肠埃希氏菌 |
MPN/100mL或 CFU/100mL |
不得检出 |
指示粪便污染 |
菌落总数 |
MPN/100mL或 CFU/100mL |
100 |
一般性污染 |
菌落总数
lmL水样在营养琼脂培养基上,在有氧条件下36℃士l℃培养48h后,所得lml水样中的菌落总数.
检测意义:作为一般性污染的指标,即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多,说明水被微生物污染程度越严重,病原微生物存在的可能性越大,但不能说明污染的来源。
指一群在36℃士1℃培养24h能发酵乳糖,产酸产气,需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
检测意义:作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群的含量,表明水被粪便污染的程度,而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
微生物指标常规检验流程图
一、水样采集
采样原则:所采集的样品具有代表性。
采样容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待测组分不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间样品各组分的浓度不发生改变。
微生物样品必须按一般无菌操作的基本要求采集,并保证在运送、贮存过程中不受污染。
注意事项
1.严格无菌操作。
2.做好标记:采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等内容。
3.从速送检。水样从采集到检验不应超过2h,在0~4℃下保存不应超过24h。
二、菌落总数测定-平皿计数法
所需培养基和试剂:营养琼脂、9ml无菌生理盐水管。
自来水水样检测
操作步骤:
1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中。
2.倾注约15mL已融化井冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水与培养基充分混匀(每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平只倾注营养琼脂养基作为空白对照)
3.待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培养箱内培养48h±2h,进行菌落计数,即为水样1mL中的菌落总数。
4.培养完成后,用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
实验数据处理:
若菌落数在100以内时按实有数报告,大于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面零的个数也可用10的指数来表示(见表1)。
国家标准(GB5749-2022)规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。
水源水检测
操作步骤:
1.以无操作方法吸取1mL充分混匀的水,注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:10稀释液。
2.吸取1:10的稀释液1ml,注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100稀师液,按同法依次稀释成1:1000,1:1000释液等备用(如此递增稀释一次,必须更换一支1m灭菌管)。
3.然后用无菌极管取稀释的水样和2个~3个适释度的水样1mL,分别注入灭菌平皿内。之后操作同自来水水样的检验步骤。
试验数据处理:
计算平均菌落数,首先选择平均菌落在30~300之间者进行计算。
计算方法和报告方式:
一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系:
水的类别 |
最清洁水 |
清洁水 |
不太清洁水 |
不清洁水 |
极不清洁水 |
菌落总数CFU/100mL |
10-100 |
100 -1000 |
1000 -10000 |
10000 -100000 |
> 100000 |
注意事项
1.菌落总数测定中,应选择合适的稀释度进行(生活饮用水,国家标准规定每毫升不得超过100个,因此以直接吸取1毫升到平板进行培养)
2.各稀释管、相应半皿做好标记。包括:水样名称、稀释度、时间、小组。
3.严格无菌操作进行水样稀释时,每一稀释度均需更换吸管。
4.倾注时,要注意营养琼脂的温度。
5.倾入琼脂后要混匀,待琼脂凝固后倒置培养。
三、总大肠菌群测定
所需培养基和试剂:乳糖蛋白胨培养液、双料乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基。
多管发酵法步骤:
初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养18-24h观察产酸产气情况。
平板分离:
将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,于36 ℃士1℃培养箱内培养18 h~24 h,观察菌落形态,挑取符合下列特征的菌落进行革兰氏染色镜检:
--深紫黑色.具有金属光泽的菌落﹔
--紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落﹔
--淡紫红色、中心较深的菌落。
复发酵证实试验:
经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,同时接种乳糖蛋白豚培养液,置36 ℃士1℃培养箱中培养24h士2h,有产酸产气者,即证实有总大肠菌群存在。
结果报告(MPN):根据 GB5750.12-2022 所附检索表报告结果。
四、耐热大肠菌群测定
所需培养基和试剂:乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤、伊红美蓝培养基
多管发酵法步骤:
初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。
耐热培养:阳性管接种在EC肉汤管中,44.5℃培养24h观察产酸产气情况。
平板培养:阳性管接种在EMB平板上,36℃±1℃培养24h。
结果报告(MPN):根据 GB5750.12-2023 所附检索表报告结果。
不同细菌在EC肉汤中的生长特征
五、大肠埃希氏菌测定
所需培养基和试剂:EC-MUG培养基
多管发酵法步骤:
耐热培养:将总大肠菌群初发酵中产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测,接种此类试管中的液体到EC-MUG管中,在培养箱或恒温水浴中44.5℃培养24h。如使用恒温水浴,在接种后30min内进行培养,使水浴液面超过EC-MUG管的液面。
结果报告(MPN):
将培养后的EC-MUG管在暗处用366nm紫外灯照射,如有蓝色荧光,则表明水样中含有大肠埃希氏菌。
计算EC-MUG阳性管数,根据 GB5750.12-2023 所附检索表报告结果。
生活饮用水中微生物检测方法总结
来源:章来源青岛海博生物及最新国标,封面图来源创客贴会员,食品微生物检测小编整理。