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线上直播完美收官
课程结束后
小伙伴们提出了工作中的一些疑问
虽然老师进行了耐心的解答
小伙伴们感觉有些问题理解不到位
希望有文稿版的
利于巩固学习
小编根据小伙伴们反馈的问题
对于老师们的答疑进行一一整理
由于内容较多
将分批分享给大家
请各位小伙伴查收今日份的知识
1.微生物试剂盒法测定中，试剂盒测定结果与传统法结果差别大的原因是什么？
传统试管法和试剂盒方法原理相同，但反应体系、培养时间都有差异，但实际中发现两种方法结果未有太大差异，如果两种方法结果差异较大，建议从人、机、料、法、环等各个细节查找原因，关键要熟练操作。
2.微生物试剂盒法测定中，不同人员在相同条件下测定结果差别大的原因是什么？
微生物法测维生素，无论是传统法还是试剂盒，建议实验室固定每个项目的检验人员，至少保证一个项目2个人员操作，以保证数据的稳定，然后制定SOP，规定不同人员操作的变异系数差异允许范围。
3.微生物试剂盒法测定中，怎样确保样品稀释在标准曲线之内？
如果是样品类型和含量比较固定，依靠经验常规重复操作即可。如果是未知样品，首先参考标签标识，按照标准的含量推算和预判含量，如果不能确定某一个含量，一个样品做2-3个稀释度，保证某一个稀释度在标曲范围内。
4.微生物法测定中，空白对照混浊如何解决？
空白对照有未接种空白和接种空白两种，如果是未接种空白浑浊，除去培养基基质的问题，最大的可能就是污染；接种空白浑浊，除去培养基和污染的因素，还有一个原因就是菌株发生变异，建议纯化到MRS平板上，再挑单菌落，在进行传代，如果还是不理想，建议更换菌株。
5.老师，如果我的穿刺保藏的工作菌株保存3个月（标准规定保存1个月）后仍能传代存活，是否可以继续使用？
标准上是一个月传一代，目的为了保证菌株的活性。如果一定要保存3个月，中间应该增加对菌株的验证，反倒麻烦。
6.叶酸和VB12检测时，在待测液制作环节时，您强调培养基煮沸后立即晾凉，我们实际应用是煮沸后自然晾晾，没有立即冷却，煮沸后到培养基使用大概用时2h
立即冷却，避免培养基颜色变深。
7.老师，理解玻璃器皿泡酸是为了使器皿更加干净，具体原因是什么呢？
都是为了保证玻璃器皿无残留，洗刷方式可以根据各自实验室规定的操作过程进行操作，最终目的就是为了洗刷干净无残留。高温烘干这步是必须的。
8.老师，请问从种子培养液中接种到接种液中，接种量是i多少？ 接种量不同会对结果有影响吗？种子培养液为什么在接种到培养液，是为了活化传代吗？
为了增加活性，如果是传代的话一般100微升。接种量不同对结果没有影响，培养时间可能会有改变。
9.老师，加标的中间液是灭菌前加入还是灭菌后？还是哪一个步骤加进去？
是灭菌前加入，为了保证和样品处理再同一条件下。
10.老师，我可以用吸光度值为横坐标，生物素含量为纵坐标绘制标准曲线吗？
可以，看操作习惯，但是标准中明确了生物素含量为横坐标。
11.四个维生素实验中避光是自然光还是所有光源？
避开自然光。
12.生物素测定在调pH值时，超过了规定的pH之后，可以用盐酸调回来吗，会影响结果吗？
不可以用HCl调回，如果需要pH值调回，需要用H2SO4，不额外引入氯离子。
13.用玻璃具塞试管可以代替钢管帽吗？
这里的玻璃具塞说的是胶塞是么，不建议使用，一是胶塞不能放到170℃以上的烘干箱烘干。而是在灭菌过程中气体压力改变会导致体积发生变化。实验室可以订制不锈钢材质的试管帽。
14.是否可以增加S2-S10的标曲浓度，如 乘以十倍?
标准给出的浓度范围，是菌液和标准出现适宜浓度梯度的范围，如果提高浓度，可能导致标准曲线没有梯度，实验失败。
15.老师，请问进行生物素试剂盒法方法验证时，是需要用质控样还是用市场购买的奶粉就行？还有，是只需要采用试剂盒方法测定结果计算精密度、准确度等，还是要同时进行国标法测定后进行两种方法的结果比较
方法验证是对该试剂盒在本实验室内的使用和国标的符合程度，在人员不足、工作量较大的情况下作为国标方法的替代，所以对照的样品建议用本工厂内的样品，也可以购买质控样和市售产品，对验证的样品进行国标法的检测，再在同样的实验条件下，用试剂盒对该样品测定，实验室自己设置可以接受的变异范围，然后对试剂盒的效果评价，参与评价的因素一定要包括准确度和精密度，由于试剂盒本身有检出限和定量限，建议联系试剂盒的供应商参与验证。可以参考的标准《商品化食品检测试剂盒方法评价》（SN/T2775-2011)；《微生物检测方法确认和验证指南》（RBT033-2020）。
