MPN法作为实验室微生物定量检测常用有效的方法之一，但是很多检测人员对MPN法的理解太肤浅、不充分，导致在使用MPN法的时候存在很多错误的认识，有时还容易导致检测结果错误。针对这些问题，今天我们就一起来聊聊“MPN法的原理、应用过程中注意事项”！

还记得刚毕业后，我就来到一个做大豆制品的公司，入职成了一名光荣的微生物化验员，在工作的第一天，化验室的师父就给我简单介绍了每天的大致工作任务。

在工作的第二天，我就很纳闷“菌落是怎么形成的、什么是MPN？”，于是我就鼓足勇气说：“师父，我有个问题想问你，什么是MPN”

师父回答：“最大可能数”，眼皮都没有抬一下。

我想了想，又胆怯的问：“那啥是最大可能数？”

师父提高了嗓门，回答：“是一种用统计学算出来的样品中最可能的数！”

我又想了想，又问：“这个数有什么意义？它是怎么算的？”

师父猛地抬起头，眉头紧锁地回了一句：“今天的培养皿都洗了么？三角瓶呢？培养基灭了没？够用吗？......”

我听闻，溜溜的去干活去了，但是还是没弄明白。后来就听见师父自言自语说，谁能告诉我啊，什么是MPN，我也有点蒙......”

要想说清楚MPN，首先要了解MPN法的概念。

一、MPN（most probable number）法原理

MPN（most probable number）法：即最近似数法，也称为最大可能数法，是食品检验中常用的方法。1915年，McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法， 这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。

?MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

?MPN值并不能表示实际菌落数， 实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。

二、MPN法的特性

MPN法：适用于具有特殊生理功能的微生物类群或者未经处理的含少量菌的食品。

?MPN法适用性广，与很多种类的食品的微生物限量要求方法一致，是常用有效的方法；

?灵敏度较高，适用于污染菌落较少的样品；

?测定MPN值时，要考虑阳性管数；

相同的MPN值，代表的实际菌落数范围却有很大的差别。假如你的产品标准为10MPN/ g，实测值为9.4MPN/g（阳性管数“0-3-0”），那么很难判定你的产品是否合格。

?MPN值非连续；

?MPN值的准确度随Pmax的减小而减小。

现在，明白了么？MPN值就是在现有因素下能推算出的微生物含量概率最大的那个浓度。接下来我们以大肠菌群检测为例一下其应用的注意事项和要点！

三、MPN法的注意事项和要点

1.MPN法注意事项：

?全过程不得超过15min。原因是大肠菌群在适宜条件下繁殖很快，15min就可以繁殖一代。

?样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间。

?接种量是MPN法成功与否的关键，一方面接种量要适当以便于出现全阳性和全阴性的稀释度，另一方面接种量必须准确。MPN表和MPN计算公式都是和接种量密切相关的。而培养基的体积是多少并不重要，只要接种后培养基浓度接近正常浓度(单倍浓度)就可以了。通常接种稀释液的体积是1 mL,这个体积必须准确，而培养基的量是10mL还是9mL影响不大。

?以48h±2h为最终观察结果时限。大肠菌群结果也以此时为最终结果，但是原始记录要体现24小时的培养结果记录。

?MPN值是基于统计的估计结果， MPN值是可能性最大的一个估计值，其95%置信区间有95%的可能包括真实结果。结果报告的MPN值要结合95%置信限来理解， MPN结果实际上是一个结果分布。

给一个例子来理解MPN结果吧！

【例】 GB 4789.3-2016 中表B. 1接种量0. 1 g、0.01 g和0.001 g对应的阳性管数2、 2、0。产品限量是“<20 MPN/g"。此产品合不合格?

查表得MPN值为“21MPN/g",其上、下95%置信限分别

为“4.5MPN/g"和“42MPN/g"。即每克样品中21个大肠菌群，有95%的可能结果分布在每克4.5(下限)个至42个(上限)之间。换句话说，接种量0.1g、0.01 g和 0.001 g对应的阳性管数2、2、0的100次检测中，有95个结果在每克4.5个至42个之间，其中每克21个的结果次数最多。

2.MPN检索表的应用

?MPN（最可能数most probable number）是表示样品中活菌密度的估测。因此MPN值只是活菌密度的估算值，并不是样品中活菌数的真值。

3.使用MPN检索表的注意点

?这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准通用的。

?表里的数字是有小数点的。

?当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时，如：阳性管数为122，123，232，233等时，建议增加稀释度（可做4~5个稀释度），使样品最高稀释度能达到阴性终点(如果污染程度不能判定，则多加一稀释度），然后再遵循相关的规则进行查找，最终确定MPN值。