（1）第一次划线及每次划线之前都要灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的总结如下：

第一次划线灼烧：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基

第二次划线之前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端。

划线结束：杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。

（2）灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连。

（4）划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。

（1）稀释操作时：

每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1－2cm处。

（2）涂布平板时：

①涂布器用70％酒精消毒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。

②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管头不要接触任何物体。