GB/T 13093-2023标准历时3年，经过成立标准修改小组、搜集样品、确定实验方案、实验验证、意见征求、评审等，最终大功告成。

一、本标准与GB/T 13093-2006 相比，主要修订内容见表1：

表1：主要修订内容

二、主要修订内容实验分析综述

（一）培养基的确定

国内外标准用于测定细菌总数的培养基是平板计数琼脂培养基（PCA）和营

养琼脂培养基（NA）两种，我们对两种培养基的成分进行了比较，见表2。

国内外测定细菌总数测定的培养温度和培养时间，见表3。

表2 用于细菌总数测定的培养基

表3 国内外细菌总数测定用的培养基、培养温度、培养时间

从表2 中可以看出，PCA 里的胰蛋白胨比NA 里的蛋白胨是更优质的“食

物”，葡萄糖更适合细菌生长。平板计数琼脂（PCA）生长的菌落不容易运动，不容易造成蔓延，无法计数的现象。

从表3 中可以看出，国内外除了我们现修订的饲料标准和环保行业的两个标准外，其余都是使用PCA 培养基。

两种培养基相同条件下和不同条件下的比较，见表4～表5。

表4NA 和PCA 培养基相同条件下的比较

表5 NA 和PCA 培养基不同条件下的比较

根据表4来看，在相同条件下使用NA和PCA培养基的实验室结果，经过统计学的T检验分析，p=0.3917。根据这个结果可以得出结论，NA和PCA培养基之间的差异并不显著。

根据表5来看，在不同条件下使用NA和PCA培养基的实验结果，经过统计学的T检验分析，p=0.9296，根据这个结果可以得出结论，NA和PCA培养基之间的差异并不显著。

从以上结果可以看出，不管是方法相同和不同，差异都不显著（p>0.05），特别是不同的检测方法，差异更不显著（p=0.9296）。同时,在重复几百次试验后，PCA 培养基上细菌生长会更好，因平板计数琼脂（PCA）生长的菌落不容易运动，不容易造成蔓延，无法计数的现象。

再者说，GB 4789.2-2022《食品微生物学检验菌落总数的测定》、

ISO 4833-2013 《Microbiology of the food chain — Horizontal method for theenumeration of microorganisms》的检测方法，以及AOAC、FDA、AS 等方法和国内进出口检验的方法，都是使用PCA 培养基。

所以，根据实验结果，以及参考其它行业国家标准，最终培养基修改为平板计数琼脂培养基（PCA），与国内外接轨。

（二）培养温度的确定

23 个不同种类样品的30℃和36℃培养温度进行实验比较，见表6

表6 PCA 培养基30℃和36℃

实验结果从表6中可以看出， PCA 培养基用30℃和36℃ 分别培养48 小时，70%的结果基本相同或高于30℃的结果；相对标准偏差RSD 在0%～2.5%之间；对两组数据进行了统计学的T 检验分析，p=0.1552，两者之间差异不显著；微生物细菌的生长温度也是36℃最为适宜；

同时GB 4789.2-2022《食品微生物学检验菌落总数的测定》，用36℃培养更加反应样品的菌落情况。考虑到大部分细菌（益生菌）都是用36℃温度培养，省去了检测单位培养箱的单独设置和检定。因此，本标准的培养温度也定为36℃。

（三）培养时间的确定

23 个不同种类的样品的培养时间的比较，见表7。

表7 PCA 培养基36℃，48h 和72h 比较

两个培养时间的结果基本相同，对两组数据进行了统计学的T 检验分析，

p=0.7806，两者之间差异不显著。同时GB 4789.2-2022《食品微生物学检验菌落总数的测定》和进出口食品、AOAC 和FDA，都是36℃，培养48 h，

并考虑到时长和简便性。因此，本标准的培养时间也定为48 h。

（四）细菌总数的计算公式

原标准的计算公式是两个稀释度进行比较，若比值小于2取平均数，若大于2取稀释倍数低的。现依据统计学的原理，计算公式中增加了修正因子，国际标准和食品标准，更加合理和准确，并对不同含量和不同稀释度可能出现的结果给出了实例，便于操作者使用。

细菌总数的报告，增加了修约的描述，以及空白试验的要求。使操作者一目了然，更加合理，并规范了文本。

具体修改如下：

1.若只有一个稀释度平板上的细菌数在适宜计数范围内，计算两个平板细菌数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中细菌总数结果。

上述数据按9.2.2数字修约后,表示为16000或1.6×104。

2.若有两个连续稀释度的平板细菌数在适宜计数范围内时，按下列公式计算：

3.若所有稀释度的平板上细菌数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均细菌数乘以最高稀释倍数计算。

4.若所有稀释度的平板细菌数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均细菌数乘以稀释倍数计算。

5.若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无细菌生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

6.若所有稀释度的平板细菌数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均细菌数乘以稀释倍数计算。