微生物沉降涂抹作业指导书

01

参考标准：

GBT 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法

GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准

02

涂抹操作（菌落总数、大肠菌群）：

2.1 配制药品：生理盐水（试管中+棉签）或直接采购无菌涂抹棒、PCA、VRBA

2.2 培养基灭菌：PCA------121℃，15分钟；VRBA------无需灭菌，煮沸即可，生理盐水------121℃，15分钟

注：灭菌后的生理盐水需冷却彻底后才可以进行涂抹操作

2.3 涂抹操作：

2.3.1 取待测物（人员手部、操作案板、工器具表面等）涂抹面积为5*5cm2；

2.3.2 涂抹后将与手部接触的棉签棒的部分折掉；

2.3.3 检样作出2~3个稀释度：

1mL（原液）

→无菌平皿中（10-1），2板菌落，2板大肠=4板

→9mL灭菌生理盐水中（10-2），2板菌落，2板大肠=4板

→于10-2试管中吸取1mL，加入9mL灭菌生理盐水中（10-3），2板菌落，2板大肠=4板

注：菌落倒入配置后灭菌的PCA，15~20mL，大肠倒入配制后灭菌的VRBA，15~20mL

2.3.4 培养：待琼脂凝固后放入培养箱中，平皿倒置（除霉菌PDA外，其余平皿均倒置培养），36±1℃，大肠培养24小时，菌落培养48小时。

2.3.5 查板计数：于N+1天，查大肠结果，N+2天，查菌落结果。

03

沉降菌（菌落总数、霉菌）

3.1 配制培养基：PCA、PDA；

3.2 倒板：按照计划沉降点数，计算所需培养基及倒板的数量，PCA约20mL/板，PDA不得少于20mL/板（培养时间长，琼脂少就干巴了）；

3.3 沉降：车间在30m²以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m²者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min（操作时，周围不得有人员走动，防止结果不准）；

3.4 收板：将手部用75%酒精消毒后再收板，切忌触碰到平板内琼脂

3.5 培养：PCA,36±1℃,培养48小时;PDA,28℃,培养5天；

3.6 查板计数：于N+2天，查菌落结果，N+5天，查霉菌结果。