一、灭菌前准备
1、所有需经灭菌的物品首先要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面气孔打开。
2、装培养基的三角瓶塞好棉塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。
二、装放
1、大型高压蒸气锅：放置灭菌物品不应超过锅内容积的80%，物品应放置锅内搁架上或铁丝筐中。
2、手提式高压锅：将物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。
三、设备检查
1、检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。
2、压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。
3、对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。
四、灭菌处理
手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：
1、手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需要更换）。
2、手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）。
3、盖好顶盖拧紧，勿使漏气；通上电源，并打开顶盖上的排气阀放出冷气（水沸腾后排气10～15min）。
4、关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）。
5、达到规定时间后，对需干燥的物品，待压力恢复到零时，即可打开排气阀，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再打开盖取物，以防止突然减压液体剧烈沸腾活容器爆破。
五、灭菌温度与时间
压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见下表：

        

         

          

           
物品
           
灭菌时间min
          
          

           
115℃
           
121℃
          
          

           
不含糖等耐热培养基
           

           
15
          
          

           
含糖类等耐热培养基
           
15-20
           

          
          

           
染菌培养物
           

           
30
          
          

           
器械器皿
           

           
30
          
         
        
六、灭菌处理
灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查，以免再度污染。
1、物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用。
2、取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用。
3、培养基或试剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃。
4、取出的物品掉落在地或误放不洁之处，或沾有水液，均视为受到污染，不可作为无菌物品使用。
5、取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放。
6、凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。
7、每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。