一、目的要求

1．了解不同微生物培养在斜面上和液体、半固体培养基中的特征。

2．进一步熟练和掌握微生物的无菌操作接种技术。

二、基本原理

微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生长情况。一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征。它们培养在斜面培养基上，可以呈丝线状、刺毛状、串珠状、疏展状、树枝状或假根状。生长在液体培养基内，可以呈混浊、絮状、粘液状、形成菌膜、上层清晰而底部显沉淀状。穿刺培养在半固体培养基中，可以沿接种线向四周蔓延；或仅沿线生长；也可上层生长得好，甚至连成一片，底部很少生长；或底部长得好，上层甚至不生长。利用微生物的培养特征，可以作为它们的种类鉴定和识别纯培养是否污染的参考。

检验微生物的培养特征，或进行其他微生物学实验时，接种过程必须保证不被其他微生物所污染，为此，除工作环境要求尽可能地避免或减少杂菌污染外，熟练地掌握各种无菌操作接种技术是很重要的。

三、器材

枯草芽孢杆菌，大肠杆菌(Escherichia coli)，金黄色葡萄球菌，白地霉（Geo-trichum candidum），蕈状芽孢杆菌（Bacillusmycoides），粘质沙雷氏菌（粘质赛氏杆菌， Serratia marcescens）；

肉膏蛋白胨斜面培养基，肉膏蛋白胨液体培养基，半固体肉膏蛋白胨培养基，接种环，接种针，无菌吸管，酒精灯等。

四、操作步骤

1．斜面接种

（1）在肉膏蛋白胨斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者。

（2）点燃酒精灯或煤气灯。

（3）将菌种试管和待接种的斜面试管，用大拇指和食指、中指、无名指握在左手中，并将中指夹在两试管之间，使斜面向上，成水平状态。在火焰边用右手松动试管塞，以利于接种时拔出。

（4）右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用右手的手掌边缘和小指，小指和无名指分别夹持棉塞（或试管帽），将其取出，并迅速烧灼管口。

（5）将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试管内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接触管壁或管口。

（6）接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上。将接种环逐渐接近火焰，再烧灼。如果接种环上沾的菌体较多时，应先将环在火焰边烤干，然后烧灼，以免未烧死的菌种飞溅出污染环境，接种病原菌时更要注意此点。

2．液体培养基接种

向肉膏蛋白胨液体培养基中接种少量菌体时，其操作步骤基本与斜面接种时相同，不同之处是挑取菌体的接种环放入液体培养基后，应在液体表面处的管内壁上轻轻磨擦，使菌体从环上脱落，混进液体培养基，塞好试管塞后，摇动液体，使菌体在液体中分布均匀，或用试管振荡器混匀。

向液体培养基中接种量大或要求定量接种时，可将无菌水或液体培养基注入菌种试管，用接种环将菌苔刮下，再将菌种悬液以无菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液体培养基。如果菌种为液体培养物，则可用无菌吸管定量吸出加入或直接倒入液体培养基。整个接种过程都要求无菌操作。

3．穿刺接种

用接种针挑取菌种（针必须挺直），自培养基的中心垂直地刺入半固体培养基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺线将针拔出，塞上试管塞，烧灼接种针。

上述几种接种法的无菌操作，凡未叙述的均按实验一操作。试验者应反复练习无菌操作接种技术，直至较熟练地掌握。

4．将已接种的斜面、液体和半固体培养基放置28—30℃温箱，培养2—3天后取出观察结果。