实验步骤
一、实验试剂
1.结晶紫溶液:
A液:结晶紫:2g,95%乙醇:20ml。
B液:草酸铵:0.8g,蒸馏水:80ml。
需在用前24小时将A液.B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
2.碘液:
碘:1g,碘化钾:2g蒸馏水:300ml。
出碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升水,使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至完全溶解,最后补足水量。
也可用少量蒸馏水,先将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。
3.脱色液:95%乙醇。
4.复染液:
A.贮存液:沙黄:2.5g,95%乙醇:100ml。
B.应用被:A液:10ml,蒸馏水:90ml。
菌片制备:染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时,用接种环蘸取菌液点在载玻片上,标本可直接在玻片上涂布,菌落涂片时,先取生理盐水1滴,置玻片上,用接种针挑去菌落,在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式,或造成细菌鞭毛脱落,影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥,并经火焰固定,固定温度不易过高,以玻片背面接触手背不烫为准,否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。
二、染色方法
1.涂片经火焰固定,加结晶紫液染1min,清水冲去染液。
2.加碘液染1min,水洗。
3.加脱色液,不时摇动约30秒,至无紫色脱落为止,水洗。
4.加复杂液,染30秒,水洗。
5.干后镜检。