1、无菌接种操作

        

         培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。
        
        

         在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。
        

1. 接种针灼烧灭菌

进入超净工作台前，用75%酒精擦拭双手，进入超净工作台内，待酒精挥发完全，点燃酒精灯，将接种环及金属棒在火焰上灼烧，将接种环烧至发红，来回灼烧金属棒，尤其是接口处。

2. 接种针冷却

接种针灭菌后，移到酒精灯旁边冷却，备用。

3. 接种针接种

配制好固体或液体培养基后，利用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，经过灭菌后培养基里无任何微生物，在超过经工作台内，用接种针等将目标菌种接种到培养基中的过程。

划线分离：

由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。

①取菌种：取出目标菌种，融化后，备用；

②接种针灭菌：灼烧接种针进行灭菌；

③接种针冷却：将接种针移至酒精灯旁边冷却；

④蘸取菌种：甘油管用75%酒精消毒，待酒精挥发完全，在酒精灯火焰略微灭菌（防止烤糊），然后用接种环蘸取一环菌种；

⑤划线：取已经备好的固体平板，边转动平板边用酒精灯火焰灭菌，打开平板（靠口朝酒精灯），用上述接种环在平板上划线，先在一侧连续划线3-4次，边转动平板边用酒精灯灼烧接种环，冷却后，用接种环穿过第一次划线部分继续划线3-4次，同样方法进行第三次划线，或第四次划线（根据菌液浓度和菌种类型确定划线次数），灼烧接种环；

⑥标记：在平板底部边缘处标记菌种名称，日期和其他信息；

⑦培养：放置于恒温培养箱中培养；

⑧保存：待培养完成后保存于4℃冰箱，待用。

涂布法接种：

先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml 菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌L 型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

斜面接种：

从生长好的平板菌种转接到新鲜斜面培养基上的接种。主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。

①取菌种：取出目标菌种平板；

②接种针灭菌：灼烧接种针进行灭菌；

③接种针冷却：将接种针移至酒精灯旁边冷却；

④挑取菌种：在火焰旁打开平板塞子，边转动平板边用酒精灯火焰灭菌，打开平板（靠口朝酒精灯），立即将接种环伸入平板上，挑取单菌落后盖上平板盖子，然后左手迅速取出新鲜试管，在火焰旁右手小指取下塞子，并灼烧试管管口，将黏有单菌落的接种环迅速放进新鲜斜面的底部，从下至上Z字划线，盖上试管塞，灼烧接种环；

⑤标记：在平板底部边缘处标记菌种名称，日期和其他信息；

⑥培养：放置于恒温培养箱中培养；

⑦保存：待培养完成后保存于4℃冰箱，待用。

液体接种

将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上试管塞再轻轻摇匀。

多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同。

倾倒法接种：

吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。

螺旋接种法：

可以在无任何全部或中间稀释的情况下快速细菌接种。对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。

微生物检验过程中的注意事项

        

         

        
        

         （1）在操作中不应有大幅度或快速的动作；
        
        

         （2）使用玻璃器皿应轻取轻放；
        
        

         （3）在正火焰上方操作；
        
        

         （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；
        
        

         （5）在接种培养物时，协作应轻、准；
        
        

         （6）不能用嘴直接吸吹吸管；
        
        

         （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。