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分光光度计的吸光度,为何要控制在1以内

放大字体缩小字体发布日期:2024-05-27
核心提示: 分光光度计的原理就是根据朗伯-比尔定律,我们简单点来说,就是不同浓度的样品有不同的吸光度,吸光度和样品浓度成函数关系
分光光度计的原理就是根据朗伯-比尔定律,我们简单点来说,就是不同浓度的样品有不同的吸光度,吸光度和样品浓度成函数关系,根据这种关系,我们就能够测出未知量的浓度。

分光光度计根据波长不同主要是分为三种:紫外分光光度计、可见分光光度计、和近红外分光光度计。我们今天主要说紫外可见分光光度计。

A段(190-340)nm、B段(340-900)nm、C段(900-2600)nm由下图可知,分光光度计可分为四个等级,我们常用的一般都是Ⅲ或Ⅳ级。

紫外区主要是氘灯,氘灯提供的光源在(180~375)nm,关于氘灯的寿命大概在1000小时左右,可见区主要是用的钨灯,钨灯提供的光源在(320~2500)nm,钨灯就是我们小时候用的电灯泡,寿命的话比氘灯要长点,具体仪器得具体分析了(1000-2000)h左右。

大家需要注意的是不同的光区,使用不同的吸收池,紫外区用的是石英吸收池,可见区用的是玻璃吸收池。不容易被磨损的,就是石英吸收池。还有一种比较容易的办法,就是石英吸收池和玻璃吸收池,在紫外区有不同的吸光度,在250nm波长时,如果吸光度<0.07Abs的就是石英吸收池。

吸光度的范围:由于分光光度计原理是根据朗伯-比尔定律,我们做样品时,尽可能的将吸光度控制在1以内,具体原因有兴趣的可以去计算。

A=lg(1/T)=Kbc
A为吸光度,T为透射比(透光度),是出射光强度(I)比入射光强度(I0).
K为 摩尔吸光系数 .它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关.

c为吸光物质的浓度,单位为mol/L,b为吸收层厚度,单位为cm


关于分光光度计预热时间,一般要求在20min左右。这个也很好理解,就是小时候那种家用灯泡,刚开启时没有那么亮,等段时间后会慢慢变亮。稳定后,我们做样品才能稳定可靠。

透射比和吸光度的换算:分光光度计上就这两个测量量,透射比和吸光度什么关系呢?吸光度= -log(透射比)

编辑:songjiajie2010

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