将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化,倒在培养皿内,每皿15ml(下层),待其凝固。此外,将融化的PDA培养基冷却到50℃左右混入试验菌,将混有菌的培养基5 ml加到已凝固的培养基上待凝固(上层)。
以无菌操作在培养基表面直接垂直放上牛津杯(内径6mm、外径8mm、高10 mm的圆形小管,管的两端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),轻轻加压,使其与培养基接触无空隙,在杯中加入待检样品(发酵液),牛津杯一般可以装240微升,勿使其外溢。加满后置37℃培养16-18小时,观察结果,抑菌圈用尺直接量就可以。在培养中,一方面试验菌开始生长,另一方面抗生素呈球面扩散,离杯越近,抗生素浓度越大,离杯越远抗生素浓度越小。随着抗生素浓度减小,有一条抑菌浓度带,在带范围内,菌不能生长,而呈透明的圆圈,这就叫“抑菌圈”。抗生素浓度越高,抑菌圈越大。