成果简介
DNA分子量标准(DNA molecular weight standards, DNA Marker)是目前分子生物学和基因工程研究中广泛应用的电泳“耗材”。其应用具有着广阔的生物技术、医药、农业等相关科研领域, 市场需求很大。香港康元堂生物科技()有限公司就是以生产DNA分子量标准而起家的生物公司。DNA分子量标准的制备目前主要以载体酶切和PCR扩增两种方式进行;由于PCR扩增的方式灵活,同时制备的DNA分子量标准条带均一,所以是目前DNA分子量标准制备业的主要生产方式。但是PCR扩增设备投入高、产能低、成本高,是一种劳动密集型的生产活动,其现状亟待改观。
技术特点
本成果建立了一种DNA分子量标准制备(生产)模式。本模式由如下两个互补的体系构成:
(1)载体的构建
利用基因工程原理构建了一系列DNA分子量标准制备用的载体(pVEC100\pUJN-1\pYe200等),经文献和搜索,目前世界范围内尚没有第二方(生物技术公司、实验室等)能够构建同种水平的“”载体,仅以单酶切就可以产生所需要的DNA片段组合。
(2)PCR扩增新模式
PCR 技术生产DNA marker 技术的新突破,成本只有现有技术(或者说PCR生产模式)的五分之一(同等产量,DNA 聚合酶、dNTPs、primers等原料的用量只有普通PCR的1/3-1/10),同时工作效率提高10倍以上,从而大大降低对设备、耗材(PCR仪,一台PCR仪可以匹敌10台以上的机器)和人力的要求。 我们所说的技术突破(或者说模式)为原始创新,策略和工艺水平,同时比现有模式更简单、更高效、成本更低。
主要技术指标:利用本成果之载体结合PCR扩增新模式可以生产目前市场行的100bp ladder、200bp ladder、DM2000、DL3000、1kb ladder等各种DNA分子量标准(DNA marker)。