潮霉素B Hygromycin B (50 mg/ml)

产品信息

货号	名称	规格	价格
M0942	潮霉素B(50 mg/ml)Hygromycin B (50 mg/ml)	1g	680
M0943	潮霉素B Hyaromycin B	1g	680
M0943-50g	Hygromycin B潮霉素B	50g	询价

产品简介

潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌(Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (GeneticinTM), Zeocin? 和 Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

本品是无菌的潮霉素B溶液(50mg/ml in PBS buffer),可直接用培养液稀释使用。

产品性质

CAS号(CAS NO.)	31282-04-9
分子式(Formula)	C20H37N3O13
分子量(Molecular Weight)	527.52
外观(Appearance)	白色至淡黄色至褐色粉末
纯度(Purity)	>90% by HPLC
溶解性(Solubility)	易溶于水
活力(Potency)	≥1050 U/mg

使用方法

1.常用筛选浓度

注意:潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定筛选浓度。

一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000 μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。

1)天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。

2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.稳定转染细胞的筛选

1)转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。

注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,将细胞稀释至丰度不超过25%。

2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。

4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5)之后更换正常培养基培养即可。

注意事项

1)潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2) 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。

3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存,2年有效。也可以放在-20℃保存,避免反复冻融。

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