用途免疫亲和柱可特异性选择吸附样品液中的VB12,从而对基质复杂的样品中的VB12起到针对性的净化作用,过柱净化后的样品可直接用于HPLC或LC-MS分析。亲和柱与HPLC或LC-MS配合使用可达到快速测定的目的,以改善信噪比,可提高检测方法的准确度。
概述VB12,别名氰钴胺素、抗恶性维生素等,是一种重要的B族维生素,摄取不足可能引起恶性、精神不振等疾病。
原理测定的基础是抗原与抗体反应,抗体连接在柱体内,样品经过提取、离心、过滤,缓慢的通过VB12免疫亲和柱,在免疫亲和柱内VB12与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他杂质。用甲醇洗脱VB12,经氮气吹干复溶后注入到分析仪器中检测。
概述VB12,别名氰钴胺素、抗恶性维生素等,是一种重要的B族维生素,摄取不足可能引起恶性、精神不振等疾病。
原理测定的基础是抗原与抗体反应,抗体连接在柱体内,样品经过提取、离心、过滤,缓慢的通过VB12免疫亲和柱,在免疫亲和柱内VB12与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他杂质。用甲醇洗脱VB12,经氮气吹干复溶后注入到分析仪器中检测。
注意事项
1.使用前,免疫亲和柱需回至室温(22~25°C)。 2.亲和柱2~8°C储存,不得冻存。- 3.不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。 4.取样量:根据需要可以适当增加或减少取样量,注意提取液量要相应改变。 5.柱容量:1000ng,当样本中待检VB12的含量除以稀释倍数高于柱容量时,需要适当降低上样液的体积,重新检测。 6.pH:亲和柱的上样溶液pH需在6~8之间,若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节pH。 7.在重力作用下过柱或用气控操作架控制流速为1.5-2mL/min。 8.上机检测时的溶剂与流动相一致可消除溶剂效应的影响。 9.有毒,操作时要穿防护服、戴长筒胶皮手套、护目镜、口罩和帽子。遇酸会释放剧毒气体氢氰酸,反应完的废液中可加入次氯酸钠溶液,处理后再排放;所有接触过的器皿、手套建议用4%次氯酸钠浸泡处理。此溶液中可以适当加些氢氧化钠,保证溶液的碱性环境,24小时后,用氰基检测试纸检查。