α-半乳糖苷酶（α-GAL）测试盒 货到付款

α-半乳糖苷酶（α-Galactosidase,α-GAL）试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能专一地催化α半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL

对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。

测定原理：

α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算 α-GAL活性。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体13mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织雷竞技百科 （g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，

加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管或96孔板中依次加入下列试剂）：

试剂名称（μL）	测定管	对照管
试剂一	25
蒸馏水		25
试剂二	35	35
样本	10	10
迅速混匀，放入37℃保温30min
试剂三	130	130

充分混匀，400nm处测定吸光值A，计算 ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。