人间质干细胞诱导成脂分化试剂盒 （埃泽思生物）

人间质干细胞诱导成脂分化试剂盒
产品基本信息

产品简介

人间质干细胞成脂诱导分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell^TM）研发的一款用于人间质干细胞诱导分化成脂的试剂盒，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成脂分化。本产品于科学研究，不能用于临床诊断、治疗，以及其他用途。

试剂	规格	数量	运输
人间充质干细胞脂肪维持基础培养基	87mL	1瓶	冰袋
人间充质干细胞脂肪维持培养添加剂I	11mL	1瓶	干冰
人间充质干细胞脂肪维持培养添加剂II	2mL	1管	干冰
以人间质干细胞脂肪维持培养基为基础，再配制人间质干细胞诱导成脂分化培养基
人间质干细胞诱导成脂分化添加剂	2mL	1管	干冰

产品内容

产品特性

l诱导分化程序简单便捷。

l诱导成脂细胞效率高。

操作方法

1.相关材料

?Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell?:AC-1001003）

?人间充质干细胞诱导成脂分化试剂盒（Applied Cell?:AC-1001029）

?成脂检测染液（Applied Cell?:AC-1001022）

?细胞固定液

?Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell?:AC-1001024/1001025）

?磷酸盐缓冲液(1×PBS)（Applied Cell^TM:Cat.AC-1001037）

2.实验准备

由于人间质干细胞诱导成脂分化试剂盒中各组分的复杂性，此试剂盒分为诱导成脂分化培养基和脂肪维持培养基，实验人员拿到试剂盒后，需要先配制人类间充质干细胞脂肪维持培养基，再以脂肪维持培养基为基础，配制诱导成脂分化培养基，具体配制方法如下：

2.1人间质干细胞脂肪维持培养基的配制

2.1.1在2-8℃解冻人间质干细胞脂肪维持培养添加剂I、II，轻晃摇匀；

2.1.2随后将添加剂依次加入到人间质干细胞脂肪维持基础培养基中（2种添加剂共13mL与87mL基础培养基彻底混合）混匀，即为人间质干细胞脂肪维持培养基。人间质干细胞脂肪维持培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

注意：人间质干细胞脂肪维持添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

2.2人间质干细胞诱导成脂分化培养基的配制

2.2.1在2-8℃解冻人间质干细胞诱导成脂分化添加剂，轻晃摇匀；

2.2.2取配制好的人间质干细胞脂肪维持培养基48mL，加入2mL解冻的人间质干细胞诱导成脂分化添加剂，轻摇混匀即为人间质干细胞诱导成脂分化培养基。人间质干细胞诱导成脂分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

注意：人间质干细胞诱导成脂分化添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

3. 实验操作

3.1诱导成脂（以6孔板为例）

3.1.1将传代或复苏冻存的人间质干细胞接种到6孔板上，密度为2×10⁴-3×10⁴cells/cm²或2×10⁴-3×10⁴cells/孔，置于37℃，5% CO₂培养箱中培养；

3.1.2当人间质干细胞融合度达到80-90%时，开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉Xeno-Free人间充质干细胞培养基，每孔加1ml预热PBS清洗一次，吸掉PBS，加入2 ml人间质干细胞诱导成脂分化培养基，以此记为第0天；

注意：人间充质干细胞诱导成脂分化培养基使用前需预热至37℃。

3.1.3每1-2天更换人间充质干细胞诱导成脂分化培养基；

3.1.4第7天开始更换，加入人间质干细胞脂肪维持培养基，每1-2天更换一次。

注意：1.培养基每1-2天换液。由于随着脂肪细胞的成熟，pH的降低会观察到培养基变黄。pH从7降到6.5，细胞增殖会变慢。pH在6.5到6时，细胞活力会降低。当培养基从红色(pH 7)变成黄色(pH≤6)时，需要马上换液。

2.换液时一定不能使培养基变干，培养基变干会降低细胞层对培养皿表面的粘附。

3.细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比，年轻供体来源的细胞的分化能力更强。

3.2成脂检测染液染色

3.2.1、每6ml成脂染液加入4ml蒸馏水制成染色工作液，混匀室温放置5-10分钟

3.2.2、脂肪诱导分化结束后，吸走6孔板中的培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入2 mL细胞固定液，固定10 min。

3.2.3、吸走细胞固定液，用1×PBS冲洗2次。，每孔中加入1 mL成脂检测染色工作液室温染色15min。

3.2.4、吸走成脂检测染液，用1×PBS冲洗2-3次。

3.2.5、将培养板置于显微镜下观察成脂染色效果，拍照。

注意：染色后显微镜观察，及时照相。如果时间过长，脂肪滴会自发破裂。