1.将所需试剂及微孔板取出，放置室温（20~25℃）30min以上，液体试剂使用前均须摇匀。

2.取出所需数量的微孔板，将不用的微孔板放回铝箔袋中，放置于2~8℃冷藏。不可冷冻。

3.配置好的洗涤工作液在使用前也需回温。

4.将样本和标准品对应微孔编号，建议每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5.每孔加入250μL左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干。

6.分别加入B试剂（标准溶液）/待测样液50μL到对应的微孔中，加入酶标抗原溶液50μL/孔，轻轻震荡混匀，遮盖后37℃恒温培养箱中反应30min。

7.小心揭开盖板，甩掉反应液，加入洗涤液250μL/孔充分洗涤5次，每次间隔40s，用吸水纸拍干。

8.分别加入F试剂（显色底物液a）和G试剂（显色底物液b）各50mL/孔，轻轻震荡混匀，遮盖后37℃恒温培养箱中显色15min。

9.加入H试剂（终止液）50mL/孔，轻轻震荡混匀，设酶标仪于450nm处读取每孔OD值。

(若无酶标仪，则不加终止用目测法可进行判定)。