法国LSI伪狂犬gB抗体检测试剂盒:
2/5 板(192 or 480个样);
用于检测猪血清 (个体或者混样);
I –说明
LSI伪狂犬gB抗体检测试剂盒(Aujeszky gB Blocking LSI Kit)是直接检测猪血清中的猪伪狂犬病病毒gB抗体的检测试剂盒。gB基因在猪伪狂犬病毒的野毒毒株和疫苗毒株中都存在 。
利用该试剂盒有两个目的:
- 了解清除伪狂犬病的区域的伪狂犬病状况.
- 了解使用疫苗区域的伪狂犬疫苗免疫的效果.
由于仔猪可以从免疫过的母猪获得抗体,使用LSI伪狂犬gB 抗体检测试剂盒(Aujeszky gB Blocking LSI Kit)在没有感染或者没有免疫时也可以检测为阳性。这并不意味着该试剂盒缺乏特异性。在随后的抗体水平检测上感染的群体(表现为稳定或者上升的抗体水平)和获得母源抗体的(表现为抗体水平下降)是有区别的。
II –检测原理
该试剂盒利用的是阻断ELISA。
1 – 样本和对照被加入包被伪狂犬病毒的微孔中,如果是阳性,伪狂犬病病毒特异性的抗体会与包被抗原反应,形成抗原抗体复合物。
2 – 洗板后加入酶标记的gB 抗体复合物进行反应。
3 –没有反应的酶标记的gB 抗体复合物在加入底物前被洗掉。酶标记的复合物可以使底物氧化变成蓝色。
4 - 加入终止液后,液体颜色变成黄色。利用酶标仪进行读数。
阳性样本表现为浅色或者无色。
III –试剂盒组成
- Reagent 1: 包被伪狂犬病毒的96 孔板.(12X8).
- Reagent 2:伪狂犬gB抗体阴性对照 .
- Reagent 3: 伪狂犬gB抗体阳性对照.
- Reagent 4: HRP标记的gB伪狂犬 gB抗体 (蓝色).
- Reagent A: PBS-Tween (10x).
- Reagent B: 样本稀释液.
- Reagent C: 底物.
- Reagent D: 终止液.
封盖膜 : 4/10
IV –注意事项
1.认真阅读和遵守各项要点。
2.在 +5±3°C (35 to 45°F)条件下保存试剂盒
3. 在使用前所有 试剂需要回温至21±4 °C.
4. 没有使用的板孔需要密封,放入密封袋在+5±3°C 条件下保存.
5. 不要混用不同批次的试剂和说明书.
6. 注意不要使真菌或者细菌污染试剂.
7.不要使用过期产品.
8. 在处理样本或者使用试剂时,不要吃东西,喝饮料和吸烟.
9. 每个样本使用一个滴头.
10. 不能用嘴吸液.
11. 在试验过程中,处理试剂需用蒸馏水.
12.底物对眼睛,呼吸道和皮肤有损坏作用 ,注意不要接触皮肤和眼睛.
13. 终止液中包含有硫酸,它是强酸具有腐蚀性,小心使用.
14.本试剂盒是兽用产品.
V – 必需但是没有提供的设备
1. 精密的吸液器 (量程为5-1000ul)
2. 滴头
3.蒸馏水
4. 洗瓶或者洗板机
5. 450 nm 波长的酶标仪
6. 离心机 (2000* g)
7.离心管和小管
8. 震荡器
VI – 可检测样本
新鲜的,冷藏+5±3°C,保存8天) or 冷冻 ( -20°C,保存1年) 的血清或者血浆可以用于检测。单个样本,混合样本和对照在使用时需要用稀释液10倍稀释.
VII – 试剂的准备
· 阳性对照,阴性对照,酶标复合物,样本稀释液,滴物,终止液可直接使用.
· 浓缩的洗液(10x) : 进行10倍稀释.
使用时利用蒸馏水进行10 倍稀释
例如 : - 1 条 :将2ml 的洗液加入18 ml 的蒸馏水中.
-1 板 :将20ml 的洗液加入180ml 的蒸馏水中
稀释后充分混匀,在+5±3°C 长期保存,但不要超过1个月.
VIII –操作步骤
注意 : 在使用前所有的试剂必须回温至+21±4°C (64 to 77 °F) .
反应的时间误差为±10%.
对照和样本的处理
需要使用双份的对照.
-添加10 AL 的阴性对照在A1,B1孔中.
-添加10 AL 的阴性对照在C1,D1孔中.
-添加10 AL 的样本至对应孔中
-添加90 AL 的样本稀释液到对照和样本孔中
用封盖膜(在盒中已准备)密封反应板,在+37±2°C 条件下反应1小时.
洗板......
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