农业农村部种业管理司关于印发《国家级地方猪遗传材料采集保存工作实施方案》的通知 (农种畜函�?019�?4�?

　　5.精液采集和制作记录表

　　6.体细胞制作记录表

　　7.国家级家畜基因库样品采集记录�?br />

附件1
任务分工�?/p>

备注�?.具体任务可根据工作需要进行适当调整、�/p>

2.*表示该品种包括两个或者两个以上保护场（区）、�/p>

　　附件2

　　国家级地方猪遗传材料制作及质量检测方桇�/p>

　　一、精液冷冻保字�/p>

　　（一）数量要汁�/p>

　　每个保种场（保护区）的每个品种保存冷冻精液不少于15000剂（0.25mL细管）或7500剂（0.5mL细管），公猪不少�?头，涵盖所有家系，每个个体保存冷冻精液不少�?00剂（0.25mL）或400剂（0.5mL）、�/p>

　　（二）供体要汁�/p>

　　符合品种特性、特征；三代以内无血缘关系，系谱清楚；健康、必检疾病为阴性、�/p>

　　（三）细管标记及包装

　　应在细管上标明保种场（保护区）建设单位代码、品种代码、供体号和生产日期。保种场（保护区）建设单位代码用汉语拼音大写首字母表示，品种代码为该品种汉字的汉语拼音大写首字母，生产日期按年月日次序排列，年月日各占二位数字，年度的后两位数组成年的二位数，月、日不够二位的，月、日前分别加��0��补充为二位数、�/p>

　　细管标记示例９�/p>

　　棉塞封口端　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　封口�?/p>

　　CQXK为重庆畜牧科学院代码，RCZ为荣昌猪的品种代码，11003为该公猪号，120525�?012�?�?5日的生产日期、�/p>

　　细管装入指形管，指形管上标记供体猪号、冷冻精液数量及生产日期。再用灭菌纱布袋将装有冷冻精液的指形管包装起来，一个灭菌纱布袋装一头猪的冷冻精液，并有标签附在纱布袋上，放入液氮中保存。纱布袋标签要求标记如下内容：袋号、品种、供体猪号、冷冻精液数量、解冻后精子的活力、�/p>

　　（四）质量检浊�/p>

　　1. 抽样数量及要汁�/p>

　　抽取总样本量�?%进行质量检测，检测合格率要求达到80%以上、�/p>

　　2. 指标

　　�?�?.25mL剂型冷冻精液

　　每支剂量��0.18mL；活�?ge;30%；精子畸形率��20%；每支前进运动精子数��2.5��107；每支细菌菌落数��800个、�/p>

　　�?�?.5mL剂型冷冻精液

　　每支剂量��0.40mL；活�?ge;30%；精子畸形率��20%；每支前进运动精子数��5.0��107；每支细菌菌落数��1600个、�/p>

　　二、体细胞冷冻保存

　　（一）数量要汁�/p>

　　每个保种场（保护区）的每个品种公猪不少于12头，涵盖所有家系；母猪不少�?5头，每个个体体外培养原代或第1代细�?管，每管1mL，用1.5mL�?.0mL冻存管包装，细胞密度�?��105/mL以上、�/p>

　　（二）供体要汁�/p>

　　符合品种特性、特征；三代以内无血缘关系，系谱清楚；健康、必检疾病为阴性、�/p>

　　（三）冷冻管标记及包裄�/p>

　　冻存管上标记编号、品种汉语名称或代码，细胞名称或代码、性别、培养代数、冻存日期。用灭菌纱布袋将冻存管包装起来，一个灭菌纱布袋�?-3头猪的冻存管，并有标签附在纱布袋上，放入液氮中保存。纱布袋标签标记品种、供体猪号、冻存管数量、�/p>

　　（四）质量检浊�/p>

　　1.抽样数量。抽取总样本量�?%进行质量检测，检测合格率要求达到70%以上、�/p>

　　2.指标。细胞密度不低于1��105�?mL；细胞活�?0%以上；支原体检测为阴性、�/p>

　　三、耳组织及基因组DNA样冷冻保字�/p>

　　每个保种场（保护区）每个品种采样数量40头（对所有公猪家系全部进行采样，繁殖公猪、繁殖母猪各1头，以及后备公猪和后备母猪各1头，且后备猪避免全同胞关系）。每个品种每个个体采�?份耳样，每份耳组织样不少�?克（�? ml冻存管保存），冻存管上详细标注品种、耳号、性别、采样日期、场地等关键信息。耳样采集后立即置于液氮中保存、�/p>

　　四、肠道菌群冷冻保字�/p>

　　（一）数量要汁�/p>

　　每个保种场（保护区）每个品种公猪不少�?0头，母猪不少�?0头，每头猪采集粪便样�?份（每份2克）、�/p>

　　（二）供体要汁�/p>

　　60日龄后备猪，符合品种特性、特征；三代以内无血缘关系，系谱清楚；近一个月没有使用抗生素、食欲正常、体重达该品�?0日龄阶段标准、�/p>

　　（三）冻存管标记及包裄�/p>

　　冻存管上标记编号、品种汉语名称、性别、采样日龄、采样日期、�/p>

　　（四）采样要求和方法

　　1．采样要汁�/p>

　　�?）每头猪采集新鲜粪便样本2份（每份2克），其中一份用2.0 mL冻存管包装后立即投入液氮�?80℃保存，另一份用5.0mL冻存管取1克新鲜粪便置�?.0 mL �?0%甘油�?%蔗糖的保护液中，液氮�?80℃保存、�/p>

　　�?）采样用冻存管要求无菌，配置的含20%甘油�?%蔗糖的保护液无菌、�/p>

　　�?）从肛门采集新鲜粪便样品，采样时每头猪要更换新的手套，防止交叉污染、�/p>

　　2.粪便样品采集和保存方泔�/p>

　　�?）采样前准备。①2 mL�? mL冻存管高压灭菌（或直接购买无菌冻存管）；②配�?5%乙醇；③冷冻保护液配置：以配�?00mL保护液为例：无菌生理盐水中加�?0 mL甘油�?g蔗糖，混匀、定容到100 mL。④液氮或干冰；⑤其它耗材：一次性手套、纸巾等、�/p>

　　�?）样品采集。①固定采样猪，用纸巾和75%乙醇擦洗肛门；②换上一次性手套，从肛门采集粪便样品；③从采集的粪便团块中，取中间部分粪便2克装�? mL冻存管，擦拭干净冻存管，在管壁标记耳号、性别、采样如期和年龄，立即投入液氮中；④另取中间部分粪便1克装入放�? mL保护液的冻存管中，混匀，在管壁标记耳号、性别、采样如期和年龄，投入液氮中。⑤在液氮中保存，或送至实验室后转移�?80℃。⑥样品运输邮寄可用干冰、�/p>

附件6

体细胞制作记录表

保种场（区）名称�

品种� � � � 顴�/p>

序号	样品叶�/p>	耳号	性别	冷冻 日期	培养代数	数量（份（�/p>	密度 �?mL	制作亹�/p>	备注
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

全国畜牧总站国家家畜基因库制

附件7

国家家畜基因庒�/p>

样品采集记录�?/p>

品种名称９�/p>

保种场（区）９�/p>

采样量：

采样人员９�/p>

采样时间９�/p>

序号	采样编号	耳号	类别	样品类型	家系编号	备注
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
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19
20
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24
25

注：1. 采样编号：品种代码（三位）和顺序号（二位），其中品种代码为该品种汉字的汉语拼音大写首字母，顺序号不足位数�?ldquo;0��补齐、�/p>

2. 类别：指能繁母猪、种公猪、后备公猪或后备母猪、�/p>

3. 样品类型：指耳组织或血液、�/p>