酵母菌的糖发酵试验-杜氏管发酵法

  酵母菌属真核生物，与细菌相比，酵母菌具有更完整的呼吸系统，可将糖类（包括糖、醇、苷、甙等）彻底氧化分解为二氧化碳和水，而细菌通常只能将糖类分解为低分子的酸等产物。因此，细菌的糖发酵试验常用酸碱指示剂通过颜色的变化检测某种糖是否能够被细菌分解利用，而酵母菌则可以通过杜氏管观察是否产气，来判断酵母菌是否能分解利用某种糖。

二、培养基的配制及接种

  （1）基础培养基（0.5%酵母液）：称取0.5g酵母浸粉，加热溶解于100mL纯化水中，分装至含导管的试管中，每支7.2mL（分装量依试管尺寸而定，120mm试管可分装3.6mL），115℃灭菌30min或121℃灭菌15min；

  （2）糖溶液：单糖（如葡萄糖、半乳糖等）或双糖（如蔗糖、乳糖等）用纯化水配制成20%溶液，三糖（如棉子糖）用纯化水配制成40%溶液，用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，备用。

  （3）将过滤除菌的糖溶液0.8mL加入至灭菌后的含7.2mL基础液的试管中（糖溶液：基础液=1:9即可），混合均匀，并排掉导管内气体；

  （4）挑取活化好的待测菌株至生理盐水中制成约10⁶-10⁸CFU/mL的菌悬液，吸取0.1mL菌悬液加入至糖发酵试管中，或用接种环（针）挑取菌苔直接接种至糖发酵试管中，25℃培养14天，逐日观察倒管内是否有气体产生。

三、试验现象及解释

  a、b分别为白色念珠菌和酿酒酵母菌的葡萄糖发酵试验，倒管内充满气体，即为葡萄糖发酵阳性反应；c、d分别为白色念珠菌和酵母菌的乳糖发酵试验，倒管内无气体产生，即为乳糖发酵阴性反应。

  注：强阳性反应通常会在数天内观察到气体迅速充满倒管；迟缓阳性反应通常要培养7-14天可观察到气体充满倒管；若培养14天后倒管内仅有少量气体，则为弱阳性反应；14天后若导管内无气体，则为阴性反应。

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