发酵企业噬菌体污染怎么处理

关键词：噬菌体污染 清除噬菌体 噬菌体防治 发酵罐消毒

噬菌体能够杀死细菌的现象在1915年由弗德里克·特沃特(Frederick W.Twort)发现(但弗德里克·特沃特并未进行深入研究也未命名)。1915年8月加拿大医学细菌学家费利克斯·德赫雷尔(Felix d'Herelle)也发现了这种病毒并把这些病毒(virus)称为噬菌体。

噬菌体的是感染多种细菌、真菌、螺旋菌等微生物的细菌病毒总称，具有病毒的特点，一旦离开宿主细胞，噬菌体既不能存活也不能复制。

噬菌体是原核生物病毒。非常微小，其直径为0. 1 μm；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。它的感染能力非常强，极易感染用于发酵的细菌和放线菌。传播蔓延的速度非常快，且很难防治，对发酵产生有巨大的威胁。它可以通过环境污染、设备的渗漏或死角、空气系统、培养基灭菌过程、补料、取样及其他操作过程进入到发酵系统中。

噬菌体广泛存在于适合宿主菌生存的泥土，污水和空气中，发酵生产中使用的微生物几乎都有被噬菌体侵染的可能性。做大肠杆菌发酵也会遇到各种各样的问题，防不胜防的是被噬菌体浸染，做大肠杆菌发酵的同学多多少少都遇到过被噬菌体浸染的时候，一旦被噬菌体浸染，真是劳身伤神，不但浪费发酵原料，耽误正常实验及工作，噬菌体浸染就是发酵人的噩梦！

发酵菌体感染了噬菌体导致发酵不正常进行，甚至倒灌。其主要症状有:

1）菌体生长受到影响，发酵液(OD值)光密度不上升或回降；

2）pH逐渐上升；

3）氨利用停止；

4）糖耗、温升缓慢或停止；

5）产生大量泡沫，是发酵液呈黏胶状；

6）镜检时菌体数量显著减少，甚至找不到完整的菌体；

7）发酵周期延长、产物生成量减少或停止；

发酵生产时浸染噬菌体会严重的影响工作的正常开展，在工作中更要严加防范，细节措施落实到位。

1、从菌种克隆及保存开始，克隆菌种的感受态菌体及其它物料要保证纯净没有被污染，保存菌种的环境要洁净避免菌种保存过程中被污染（特别注意，发生异常的菌种要立马和其它菌种分开保存），且保存菌种的同时要保存质粒以备菌种异常时立马转化新菌种。

　　2、发酵时的培养基要保证没有被噬菌体浸染，特别是酵母浸膏可通过培养噬菌体的方式去检测其没有被浸染。

　　3、发酵场所要保持清洁，要定期进行消毒处理。空气系统要定期消毒并检查，发酵种子制备的环境要保持洁净，地沟，污水池等也要保持清洁，并定期消毒，补料设施要严格进行消毒，定期检测发酵罐，避免消毒死角的存在。

　　4、发酵罐接种时要无菌操作，避免接种时污染。

　　5、发酵过程取样后的废液要进行收集灭菌处理，发酵过程的尾气要处理后再排掉。

6、发酵液离心后的上清要进行灭菌处理，并和发酵空间隔开处理，发酵场所洒落的培养基等要及时清洗干净。

一旦发酵菌浸染噬菌体后，就要从菌种，培养基，环境，发酵系统管路，地沟，污水池，排风口等进行全面的消毒排查，物理消毒方式通常很难将噬菌体消除，通常需要物理和化学方式相结合处理噬菌体污染。

必要暂停发酵培养工作，对整个发酵环境，管路，器材进行消毒处理，可用紫外灯照射加过氧化氢干雾熏蒸的方式对整个发酵场所进行消毒，在不影响生产的情况，可以停止发酵一个月的时间，让发酵环境的活菌消除或减少到限度。

发酵生产环境或实验室空间化学熏蒸比较安全可靠的方法是过氧化氢气体灭菌方式，代替传染有害有毒的甲醛熏蒸。过氧乙酸和甲醛已被否定，目前流行和被接受的是VHP过氧化氢空间灭菌，其广谱、高效、安全无害，无残留的消毒方法成为新一代选择。在解决发酵生产中预防和防治噬菌体浸染问题具有重大意义，这里需增强防重于治的意识，也就是说需要定期的环境空间全面熏蒸消毒。那么过氧化氢干雾灭菌装置必不可少，因为要经常使用，并且可以短时间内完成消毒，运行成本低，不能造成不良腐蚀影响等。

叠加由研发的比林科汉过氧化氢干雾消毒机产品，为解决噬菌体创造了基础硬件设施。比林科汉过氧化氢干雾消毒技术，智能化、数字化、可视化的全自动发酵车间消毒方式广泛受到关注。其采用冷蒸发文丘里干雾技术原理，干雾技术累积十五年，世界性先进，干雾气体肉眼不可见、无孔不入。

突破性解决了过氧化氢消毒有腐蚀性的普遍问题，取代了VHP汽化过氧化氢、高温闪蒸、电离等高浓度腐蚀性方式，以进口比利时杀菌产品为基础的高活性杀菌、低浓度即可达到的效果。其结合比林科汉干雾消毒机，的干雾扩散和自由布朗运动，在出雾颗粒方面，甚至远超同类设备，真正的目中无雾（干雾），不留任何污染的地方，实现更温和的消杀手段和更好的材料兼容性。润联瑚工认为具有以下优点。

1）发酵车间或实验室整体房间快速杀灭噬菌体、病原体，细菌，真菌，霉菌和病毒，广谱的杀菌效果；

2）快速高效省时，当天灭菌即可当天投产使用；

3）杀灭噬菌体效果达到＞99.999%，并且是比较彻底全面覆盖；

4）消杀全过程无需人员值守，自动化工作，可在外面远程控制，动态实时监控消杀过程；

5）专业化的服务方案及GMP规范指导，完善的效力验证文件及报告。

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