细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。
在所有的细胞离体培养中,困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。
⑴血清:动物细胞离体培养常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子,如激素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里,血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。
⑵支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃,塑料等作为支持物。
⑶气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节,不断维持所需要的气体条件。
无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖,必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。
细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。培养基营养丰富,也是微生物的营养物质,细胞培养微生物污染是常发生的事情,也是非常严重的事情。
一个细胞经过大量培养成为简单的细胞或极少分化的多细胞的一个过程,整个过程对培养环境的要求极其严苛,为避免被微生物污染,细胞培养箱的清洁与消毒是必不可少的。然而,针对培养过程中面临的各种污染源,各细胞培养箱微生物的控制方式和效果不尽相同,对于细胞来说,非常理想的培养环境同样也适合这些污染物的生存,培养箱本身是不会辨别的,而细胞培养中大部分时间里细胞都是位于培养箱内,因为箱体内能否抑菌或灭菌非常关键!
细胞培养霉菌污染的原因:
1、取放细胞时引起的污染
细胞培养过程中,取放细胞是基本的操作,培养房开关门的瞬间,环境中的微生物或多或少会进入培养箱中,而且内外温差导致内门冷凝水的产生,极易吸附微生物,都是造成培养箱污染的风险因素。
2、灭菌不彻底造成的二次污染
细胞培养过程中,因其它操作问题(如培养基泼洒,水盘污染等),造成培养房的大规模污染也时常会发生,此时就需要对培养箱进行灭菌消毒,常规的消毒(如紫外照射)只能达到表面消毒的效果,特别是对真菌等顽固性污染,无法进行彻底灭菌,导致后续培养过程中细胞污染频发。
培养箱是可以对细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的恒温设备。当培养箱出现霉菌污染,我们应该怎样进行处理呢?首先我们可以看看培养箱自身带不带有灭菌功能,如果没有我们可以先用纯水擦洗,再用诺福杀孢子剂擦拭,晾干即可完成杀菌作用。诺福杀孢子剂可彻底解决细胞培养箱霉菌的污染问题。
诺福为复合型杀孢子剂,主要成分过氧化氢胶质银离子,无色无味无毒,无残留性,基本无腐蚀,不产生微生物耐药性,不造成重复污染等特点,由于其的作用原理,能够杀灭包括细菌芽孢、真菌孢子、酵母菌、霉菌、病毒等各种类型的微生物。诺福杀孢子剂可以长期使用于培养箱杀霉菌。某些过氧乙酸的杀孢子剂也能杀灭霉菌,使用的成本稍低一些,但是过氧乙酸本身具有较大的毒性和刺激性,对设备或材料的腐蚀性很大,不宜经常使用。
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