1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？
关于漂移问题
①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定
②流动相发生変化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
关于快速变化问题
①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出
③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
2.为何会基线漂移
原因
①柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器）
②流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移）
③流通池被污染或有气体
④检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）
⑤流动相配比不当或流速变化
⑥柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
⑦流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
⑧样品中有强保留的物质（高K值）以头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线
⑨使用循环溶剂，不提倡。未调整检测器
⑩检测器没有设定在最大吸收波长处
解决方法
①控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器
②使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用在线脱气或氦气脱气
③用甲醇或其他强极性溶剂中洗流通池。如有需要，可以用1N的的酸（不要用盐酸）
④取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗
⑤更改配比或流速。为避兔这个问题可定期检查流动相组成及流速
⑥用中等强度的溶剂进行冲洗。更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱
⑦检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
⑧改变分析条件。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子
⑨重新设定基线。使用新的流动相
⑩将波长调整至最大吸收波长处。重选检测波长
3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法
①样品量不足，解决方法为増加样品量
②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检器
④检测器衰减太多。调整衰减即可
⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗
⑦检池中有气泡。解决办法为排气
4. 如何进行色谱柱的维护？
①建议检测前样品和流动相进行过滤
②建议每天做完样品后及时进行清洗
③常规检测：测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min，最后保存在纯甲醇或纯乙腈中
④使用缓冲盐条件：
a.等度条件：使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min
b.梯度条件：使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min
注意：过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例，只是不含有缓冲盐
c.缓冲盐冲洗干净后，采用90%有机相反向冲洗60min，最后保存在纯有机溶剂中
注意：如果使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜
5.规则的基线噪音是如何产生的
原因
①在流动相、检测器或泵中有空气（尖锐峰）
②漏液
③流动相混合不完全
④温度影响（柱温过高，检测器未加热）
⑤在同一条线上有其他电子设备（偶然噪声）
⑥泵振动
解决方法
①流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气
②检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封
③用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
④减少差异或加上热交换器
⑤断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。采用精密级稳压电源
⑥在系统中加入脉冲阻尼器
6.不规则的基线噪音是如何产生的
原因
①漏液
②流动相污染、变质或由低质溶剂配成
③流动相各溶剂不相溶
④检测器/记录仪电子元件的问题
⑤系统内有气泡
⑥检测器内有气泡
⑦流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音
⑧检测器灯能量不足
⑨色谱柱填料流失或阻塞
⑩流动相混合不均匀或混合器工作不正常
解决方法
①检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液
②检査流动相的组成
③选择互溶的流动相
④断开检测器和记录仪的电源，检查并更正
⑤用强极性溶液清洗系统
⑥清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器
⑦用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
⑧更换灯
⑨更换色谱柱
维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置
7.氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？
答：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水（50:50）溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％
8.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子
②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子
③可能柱超载，减少进样量
9.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法是什么？
①样品量不足，解决办法为增加样品量
②样品未从柱子中流出，可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
③样品与检测器不匹配，根据样品化学性质调整波长或改换检测器
④检测器衰减太多，调整衰减即可
⑤检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数
⑥检测器池窗污染，解决办法为清洗池窗
⑦检测池中有气泡，解决办法为排气
⑧记录仪测压范围不当，调整电压范围即可
⑨流动相流量不合适，调整流速即可
⑩检测器与记录仪超出校正曲线，解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线
10.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？
①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理
②比例阀失效，更换比例阀即可
③泵密封垫损坏，更换密封垫即可
④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法
⑤系统检漏，找出漏点，密封即可
⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的
11.HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：
①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查
②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查
③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查。只用于使用过的柱子
④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题
12.为何出现峰展宽？
①样品体积过大：用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%
②在进样阀中造成峰扩展：进样前后排出气泡以降低扩散
③数据系统采样速率太慢：设定速率应是每峰大于10点
④流动相粘度过高：增加柱温，采用低粘度流动相
⑤检测池体积过大：用小体积池，卸下热交换器
⑥保留时间过长：等度洗脱时增加强溶剂含量，也可用梯度洗脱
⑦柱外体积过大：将连接管径和连接管长度降至最小
⑧样品过载：进小浓度小体积样品
13.流动相出现气泡的原因有哪些？
①流动相溶液中往往因溶解有氧气或空气而形成气泡
②液路阻力比较大，吸液时出现了真空气泡
③系统开始工作时未能将流路中的空气排除干净
④在注入样品时混入了空气
14.常用的实验室脱气方式还有哪些？
①加热回流脱气，脱气效果最佳，但无法保持
②氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多
③真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失
④超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好
15.氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？
答：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水（50:50）溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％
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