问题 |
原因 |
解决方案 |
边缘效应 |
组织边缘贴附不牢，边缘组织松脱漂浮于液体中 |
APES/多聚赖氨酸处理玻片；组织切片尽量薄；尽量避免选用坏死较多的组织 |
试剂未充分覆盖组织 |
滴加试剂时让试剂完全覆盖组织 |
|
非特异性染色体 |
抗体雷竞技百科 问题 |
使用雷竞技百科 有保证的抗体 |
抗体孵育时间长 |
减少孵育时间 |
|
抗体浓度过高 |
降低抗体浓度 |
|
一抗为多抗 |
使用单克隆抗体 |
|
内源性过氧化物酶及生物素 |
延长灭活时间 |
|
封闭不足 |
延长封闭时间 |
|
DAB孵育时间过久或浓度过高 |
按说明书配置试剂，镜下控制反应时间 |
|
抗体孵育后洗涤不充分 |
每次孵育之后洗3*5次 |
|
滴加试剂时干片 |
及时滴加试剂 |
|
切片在缓冲液中浸泡过久 |
抗原修复之后及时封闭加一抗，不能过夜 |
|
阴性结果 |
抗体浓度及雷竞技百科 |
选择有雷竞技百科 保证的抗体，先做预实验摸索抗体使用浓度 |
抗原修复不全 |
摸索合适的抗原修复方式及修复时间 |
|
抗原丰度 |
正常阴性 |
|
封闭时间过长 |
减少封闭时间 |
|
DAB孵育时间短 |
镜下控制显色时间 |
|
细胞通透不全，抗体未能进入细胞反应 |
选择合适的通透剂及其反应时间 |
|
一抗二抗不匹配 |
选择正确来源的二抗 |
|
脱片 |
玻片未处理好 |
玻片清洗干净后用APES或多聚赖氨酸处理 |
切片厚薄不均匀 |
更换刀片；调整好切片机状态 |
|
烤片时间或温度不够 |
60摄食度2小时 |
|
组织自身问题 |
坏死组织及骨组织本身易脱片 |
|
抗原修复时温度迅速变化 |
抗原修复后让其自然冷却 |
|
操作时用力过猛 |
有脱片嫌疑的切片不要用力甩，用吸水纸吸干残余液体 |
|
染色弱 |
抗体浓度低，孵育时间短 |
提高抗体浓度，延长反应时间 |
试剂使用超过有效期 |
试剂定时更新 |
|
滴加试剂时残余缓冲液过多使试剂稀释 |
滴加试剂前尽量减少残余液体 |
|
封闭过度 |
减少封闭时间 |
|
着色不均匀 |
切片厚度不一致 |
更换刀片；调整好切片机状态 |
试剂配制未混匀使局部浓度不一致 |
试剂充分混匀后滴加 |
|
试剂未完全覆盖组织 |
滴加试剂时让试剂完全覆盖组织 |
|
脱蜡不完全 |
更换脱蜡剂或延长脱蜡时间 |
 |
 |
在线咨询
鲁公网安备 37060202000128号
