动物源性食品中克伦特罗等3种β-受体激动剂残留检测的固相萃取方法
(Copure?MCX)
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为动物源性食品(动物肌肉和肝脏)中克伦特罗(clenbuterol)、沙丁胺醇(salbutamol)、莱克多巴胺(ractompamine)等3种β-受体激动剂的样本前处理净化方法,HPLC法作为检测手段。Copure?MCX(60mg/3mL)柱净化效果良好,回收率满足测试要求,重现性好,与知名厂商同型号柱性能相当。
二、实验目标物
克伦特罗(CAS:37148-27-9)、沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)、莱克多巴胺(CAS:97825-25-7)。
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品(动物肌肉和肝脏)中克伦特罗(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、莱克多巴胺(Rac)等3种β-受体激动剂残留药物的检测。
四、参考标准
《GB/T 22286-2008 动物性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》。
五、实验材料
Biocomma?Copure?MCX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMCX360);W品牌MCX固相萃取柱60mg/3mL。
六、实验方法
1、样品提取
称取2±0.01 g经捣碎的猪肉样品,于50 mL离心管中,加8 mL乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L,pH5.2),振荡提取15min, 4000 r/min离心10 min,取上清液4 mL于50 mL离心管中,并加入0.1 mol/L高氯酸溶液5 mL,混合均匀,用高氯酸调节pH到1±0.3。4000 r/min离心10 min后将全部上清液转移到50 mL离心管中,用10 mol/L氢氧化钠溶液调节pH到11。加入10 mL饱和氯化钠和10 mL异丙醇-乙酸乙酯(6:4, v/v)混合溶液,充分提取5 min,在4000r/ min离心10 min。
转移全部有机相,在40 ℃水浴下氮吹干。加入5 mL乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L,pH5.2),超声混匀,使残渣充分溶解后备用。
2、SPE柱净化
(1) 活化:MCX柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化。
(2) 上样和洗脱:取上述残渣溶液上柱,控制流速0.5 mL/min。后依次用2 mL水、2 mL 2%甲酸水、2 mL甲醇淋洗柱子并抽干,用2 mL5%氨化甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。
(3) 重新溶解:收集洗脱液,于40 ℃氮气吹干,准确加入1.0 mL 0.1%甲酸/水-甲醇(95:5,v/v)溶液溶解残余物,0.22μm滤膜过滤,供高效液相色谱测定。
3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2690
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6mm Id,5 ?m)
检测器:紫外249nm,荧光激发波长226nm,发射波长306nm
流动相:A:甲醇B:0.1%甲酸水溶液
洗脱方式:梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速:1.0 mL/min
柱温:30 ℃
进样量:20 ?L
七、实验结果
1、添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中克伦特罗(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、莱克多巴胺(Rac)等3种
β-受体激动剂的添加回收结果
表2 添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中3种β-受体激动剂的添加回收结果
表3 W品牌同型号柱,添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中3种β-受体激动剂的添加回收结果
2、添加水平为1.0mg/kg猪肉基质中三种β-受体激动剂检测色谱图
图1 沙丁胺醇和莱克多巴胺的荧光色谱图
图2 克伦特罗的紫外色谱图