动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法(Copure?HLB)
一、实验目的
本法为以Copure?HLB(60mg/3mL)柱开发的针对动物源食品(禽肉、畜肉和水产品)中氯霉素样本前处理净化方法,HPLC法作为检测手段。Copure?HLB(60mg/3mL)柱净化效果良好,回收率满足测试要求,重现性好,与知名厂商同型号柱性能相当。
二、实验目标物
氯霉素(CAS:56-75-7)
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品(禽肉、畜肉和水产品)中残留药物的检测。
四、参考标准
《农业部1025号公告-21-2008 动物源食品中氯霉素残留检测气相色谱法》。
五、实验材料
Biocomma? Copure?HLB固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360);W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。
六、实验方法
1、样品提取
取5±0.05 g猪肉样品,于50 mL离心管中,加入20 mL乙酸乙酯混合2 min,4000 r/min离心15 min,取上清液于另一离心管中,再用20 mL乙酸乙酯重复提取残渣1次,合并两次提取液,并加入500 μL氨水,于45 ℃旋转蒸发近干,加入500 μL甲醇混合1 min,加入10 mL4%NaCl涡旋混匀10 s,加入10 mL正己烷摇匀20次,4000r/min离心5 min,弃去上层,再用10 mL正己烷脱脂一次,加入500 μL氨水混匀供上柱净化用。
2、SPE柱净化
(1)活化:依次用2 mL甲醇、2 mL水活化。
(2)上样和洗脱:取上述备用液重力作用下过柱依次用2 mL水、1 mL甲醇/乙腈/水/氨水(15:15:65:5, v/v)淋洗上样柱并抽干,用2 mL 5%氨化甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。
(3)重新溶解:收集洗脱液,于45 ℃氮气吹干,准确加入1.0 mL 甲醇/水(4:6, v/v)溶液溶解残余物混匀,0.22 ?m滤膜过滤,供高效液相色谱测定。
3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2690
检测器:Waters 2487 双波长检测器;检测波长:278nm
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6 mm,5?m)
流动相:A: 水 B: 甲醇
洗脱方式:等度洗脱,甲醇:水=40:60(v/v)
流速:1.0 mL/min
柱温:30 ℃
进样量:20?L
七、实验结果
1、添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)的添加回收结果
表1 添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)的添加回收结果
表2 W品牌同型号柱,添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)的添加回收结果
2、添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)检测色谱图
图1 添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)检测色谱图