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恒温扩增荧光法检测技术 应用于食品中沙门氏菌的快速检测

放大字体缩小字体发布日期:2017-10-24 浏览次数: 617
核心提示:试剂盒基于环介导恒温扩增技术(LAMP)荧光法检测,利用两对特殊引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,使模板两端引物结合处循环出现环状单链结构,引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应,实现在恒温条件下(60-65℃)进行连续快速扩增。反应体系中加入了显色指示剂,阴阳性结果显色差异显著,扩增结束后可以通过观察荧光显色剂的颜色变化判读结果,无需开盖避免了扩增产物交叉感染性的可能性。LAMP是一种新型的恒温核酸扩增技术,该技术无需常规PCR中变性、退火、延伸等步骤不同温度设计要求,只需提供一个适宜的恒定温

1. 技术原理


试剂盒基于环介导恒温扩增技术(LAMP)荧光法检测,利用两对特殊引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,使模板两端引物结合处循环出现环状单链结构,引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应,实现在恒温条件下(60-65℃)进行连续快速扩增。反应体系中加入了显色指示剂,阴阳性结果显色差异显著,扩增结束后可以通过观察荧光显色剂的颜色变化判读结果,无需开盖避免了扩增产物交叉感染性的可能性。LAMP是一种新型的恒温核酸扩增技术,该技术无需常规PCR中变性、退火、延伸等步骤不同温度设计要求,只需提供一个适宜的恒定温度即可,因此,与常规PCR相比,LAMP技术更适合现场高通量快速检测,具有简单、快速、特异性强的特点。

2. 应用于食品中沙门氏菌的快速检测

恒温扩增荧光法检测技术可运用于快速检测食品中的沙门氏菌等致病菌。

应用于食品快速检测有两种方式:

1、快速筛查。对食品样品快速增菌后,直接采用基因检测试剂盒来快速筛查有没可疑致病菌(对大多数致病菌在13小时内即可完成筛查);
2、快速鉴定。对食品样品进行增菌,平板分离,使用基因检测试剂盒对可疑菌落进行快速准确的鉴定(1小时内完成鉴定)。

3. 环凯恒温扩增荧光法检测试剂盒组成

4. 环凯恒温扩增荧光法检测试剂盒操作指南

5. 环凯恒温扩增荧光法检测试剂盒特点

操作简单:通过几部加样后,60-65℃范围内恒温条件下即可完成扩增。

使用便捷:一管式冻干,免去繁琐的配制步奏

仪器简单

扩增条件简单,能提供恒温装置即可。

特异性高:

比传统PCR灵敏度高10-100倍,可检测5-20个拷贝。

快速判读

使用合适的增菌液收集到足够菌体后,40-60分钟内可完成检测,肉眼观察颜色变化即可判读结果。全部检验流程仅需约13h(详细检验流程参见说明书)。

6. 沙门氏菌快速筛选操作流程
恒温扩增荧光法检测技术,2h内高效初步筛查。30h内为产品能否出厂提供有效参考。

7. 沙门氏菌可疑菌落快速鉴定操作流程

8. 恒温扩增试剂盒产品列表

货号

品种名称

规格

检验限

CP0300

四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB增菌液)

10mLX 20支

CP0050

亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC增菌液)

10mLX 20支

023052

亚硫酸铋琼脂(BS)

250g/瓶

CP0560

沙门氏菌显色培养基

90mm X 20个

KJD05L

沙门氏菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)

24tests

14 CFU/Test

CP0150

营养琼脂斜面

8mL X 20支

071740

沙门氏菌生化鉴定试剂盒

10种X 10次/盒

沙门氏菌诊断血清

有多种规格,请根据需要咨询销售或技术支持


9. 需要配套的仪器及耗材列表

所需的仪器

规格

备注

侧边过滤样品均质袋(食品检测)

?容量400ml,袋子规格190*300mm

固体食品样品处理时用于样品均值之用。采用过滤袋可显著减少样品残渣,利于微生物的分离及DNA的提取。

可调移液器

?1-10μL10-200μL100-1000μL各一把

高速振荡样品前处理器

?ShockMixer-1

?均质频率93次/s,相比拍击均质器9次/s的均质频率,高速振荡样品前处理器能产高频,有更好的微生物释放率。

?样品碎片少:样液澄清,易于取样、过滤,使用移液枪也不怕会堵塞枪头,利于微生物的分离及DNA的提取。

?更少的破袋率、更广的样品适用性:无需打碎样品,不会导致样品处理袋的破裂,样品适用性更广,甚至可用于硬糖,压片药丸、鱼骨、核桃等质地坚硬的样品。

?可预设均质时间(1-12分钟)

固体食品样品均质之用。

高速离心机

?转速:16500

?离心力(×g):18780

?容量:12×10ml

?控制及驱动系统:交流变频电机,微机控制,直接驱动

恒温金属浴

?温度设定范围:0~100

?温度显示分辨率:0.1

?升温时间:≤8min(室温20~100℃)

?降温时间:≤8min(100~4℃)

?温控精度:≤±0.2

?温度波动度:≤±0.1温度均匀性:≤±0.5

?时间设定范围:0~99h59min

?循环设置功能、程序段设置功能、自动记忆、QC报告打

能准确提供60~65℃恒温条件的任何通用设备,如水浴锅、恒温箱、恒温金属浴、PCR仪等。

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